Клетки свиньи и кролика, подобные эмбриональным стволовым: получение из преимплантационных эмбрионов и гаструл и характеристика

• Автор: Селюгин, Максим Александрович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Стволовые клетки
1.2 Региональные стволовые клетки
1.3 Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК)
1.4 ЭСК сельскохозяйственных животных
1.5 Использование фидерных слоев для длительного культивирования
эмбрионов сельскохозяйственных животных in vitro
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Приборы и оборудование
2.2 Культуральная посуда
2.3 Питательные среды и растворы
2.4 Культуры клеток
2.5 методы Культивирования клеток
2.5.1 Приготовление фидерных слоев из перевиваемых эмбриональных
фибробластов мыши линии STO
2.5.2 Приготовление фидерных слоев, представленных первичными
клетками Сертоли свиньи
2.5.3 Приготовление фидерных слоев из перевиваемой клеточной линии
тестикул поросенка (ПТП)
2.5.4 Пригототовление фидерных слоев из клеток СПЭВ
2.5.5 Приготовление фидерных слоев из клеток FBT
2.5.6 Приготовление фидерных слоев клеток ЗТЗ BaltAC
2.5.7 Приготовление фидерных слоев из клеток NIH ЗТЗ
2.5.8 Культивирование клеток BRL
2.5.9 Приготовление фидерных слоев, представленных клетками RUF
2.5.10 Культивирование первичных эмбриональных фибробластов мыши и

кролика для приготовления фидерных слоев
2.5.10.1 Получение первичной культуры эмбриональных фибробластов
2.5.10.2 Культивирование первичных эмбриональных фибробластов мыши и
кролика (МЭФ и КЭФ)
2.6 Техника получения преимплантационных эмбрионов свиньи и
кролика
2.7 Получение эмбрионов кролика на стадии гаструляции
2.8 Оценка качества преимплантационных эмбрионов
2.9 Оценка качества эмбрионов на стадии гаструляции
2.10 Оценка колоний ЭС-подобных клеток
2.11 Приготовление кондиционированных сред
2.12 Желатинизирование пластиковой посуды
2.13 Силиконизирование посуды
2.14 Уравновешивание парафинового масла со средой
2.15 Определение жизнеспособности клеток
2.16 Подсчет посевной концентрации клеток
2.17 Подсчет итоговой концентрации клеток
2.18 Подсчет индекса пролиферации
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Получение клеток свиньи с ЭС-подобной морфологией
3.1.1 Характеристика биологического материала
3.1.2 Влияние стадии эмбриогенеза и фидерных слоев клеток на получение
колоний ЭС-подобных клеток свиньи
3.1.3 Характеристика ЭС-подобных клеток свиньи
3.2 Получение из бластоцист кролика клеток с фенотипом, подобным эск,
и их характеристика
3.2.1 Длительное культивирование преимплантационных эмбрионов
кролика in vitro на фидерных слоях
3.2.2 Влияние некоторых ростовых факторов на эффективность получения

клеток кролика с ЭС-подобной морфологией из длительно культивируемых бластоцист
3.2.3 ВыделениеЭС-подобных клеток из бластоцист кролика
3.2.4 Влияние продолжительного культивирования бластоцист на
получение ЭС-подобных клеток кролика
3.2.5 Культурально-морфологическая характеристика ЭС-подобных клеток
кролика в культуре
3.3 Получение от эмбрионов на стадии гаструляции ППЗ-подобных
клеток кролика и их характеристика
3.3.1 Сравнение способов получения ППЗ-подобных клеток кролика
3.3.2 Характеристика первичных культур клеток кролика, выделенных из
гаструл
4 ОБСУЖДЕНИЕ
5 ВЫВОДЫ
6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

необходим прямой контакт с монослоем клеток, а их влияние на развитие зародыша носит, скорее всего комплексный характер.
Исходя из вышеизложенного, можно заключить, что разработка методов позволяющих получать, сохранять в недифференцированном состоянии и манипулировать с ЭСК сельскохозяйственных животных остается актуальной. Противоречивость данных, большое количество научных работ биологов всего мира на эту тему свидетельствуют о повышенном интересе к исследованиям в этой области биотехнологии.
Решению части из описанных проблем посвящена настоящая работа.