Исследование конъюгатов белков и нерастворимых соединений d-элементов в бесприборном иммунохимическом анализе

• Автор: Орлова, Ольга Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Киров
• Количество страниц: 90 с.

ВВЕДЕПИЕ
ГЛАВА 1. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И МОНИТОРИНГА ИНФЕКЦИОННЫХ И СОМАТИЧЕСКИХ ПАТОЛОГИЙ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)
1.1. Виды иммунохимического анализа
1.2. Методы генного зондирования
1.3. Метод диагностических экспресс-тестов
1.4. Иммуномембранный метод
1.5. Иммунохроматографический анализ
1.6. Иммуносорбенты для иммунохимического анализа
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Материалы исследования
2.2 Методы исследования
2.3. Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выбор оптимальных твёрдофазных носителей
3.2. Сопоставление различных способов проведения иммунохимического анализа с использованием гидрозольных препаратов
3.3. Определение оптимального модификатора для твёрдой фазы
3.4. Результаты хемосорбции в модельной системе
3.5. Экспериментальные данные по определению антител к дифтерийному анатоксину в сыворотке крови
3.6. Изучение гидрозольных диагностикумов для детекции антител к
М. tuberculosis

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕПИЕ.
Актуальность проблемы. При развитии патологического состояния болезни в организме человека в его биологических жидкостях: крови, моче, слюне появляются определенные маркеры - специфические вещества сложной, как правило, белковой природы. При обнаружении тех или иных специфических маркеров врач может судить о факте заболевания. В ряде случаев это удается тогда, когда больной не подозревает о начале и развитии болезни. Следовательно, необходимо внедрять в практическую деятельность врача новые экспрессные методы ранней диагностики. В распоряжении любого врача-клинициста должны быть диагностические препараты, позволяющие осуществить хотя бы качественную диагностику (по принципу «да»—«нет»)с последующим более полным исследованием в случае «да» конкретной патологии, соответствующей его специальности.
Эти препараты должны быть дешевы, экспрессны - постановка реакции и считывание результатов не более 1-2 минут, не требующих дополнительных приборов (возможность проводить реакции непосредственно на рабочем месте), возможность ставить реакции с малыми объемами препарата и биоматериала, взятого от больного (10-20 мкл). Кроме того, они должны иметь стабильные и воспроизводимые иммунохимические свойства, т.е. выявлять маркеры того или иного заболевания в самом широком спектре биологических жидкостей (в моче, слюне, сыворотке крови и т.д.) в минимальных концентрациях. В настоящее время иммунохимические методы далеки от сформулированных выше требований. Для большинства из них характерна не экспрессность, высокая стоимость одного анализа, требуются дорогостоящие приборы. Учитывая отсутствие приборов, простоту применения и быстроту постановки реакции, можно рекомендовать эти препараты для решения задач, стоящих перед МЧС, в практику прямого переливания крови в медицине катастроф (в условиях, приближенных к полевым), когда необходимо защитить пациента при
2.2.6.З. Синтез антигенного гидрозольного диагностикума на основе “берлинской лазури” Ге4[Ге(СМ)6]з.
Синтез осуществляли путём одномоментного смешения 0,01М растворов БеСІз и К4[Те(СМ)6]з, причём раствор К4[Те(СК)б]з берут в избытке (20%-25% по объёму), по отношению к объёму раствора БеСЦ. Полученный, исключительно стабильный золь коллоидного раствора «берлинской лазури» используют в дальнейшем для синтеза диагностикумов.
2.2.7. Методики разведения подлежащих тестированию сывороток для последующего анализа.
2.2.7.1. Разведение 1:25.
Проводили в планшетах с И-образными лунками. В верхний ряд лунок вносили 96 мкл раствора для разведения, затем добавляли в них по 4 мкл отрицательной и положительной сыворотки. В остальные лунки вносили по 50 мкл буферного раствора. Раститровывали многоканальной пипеткой по 50 мкл, начиная с первого ряда. В последние лунки сыворотки не вносили (оставляли для контроля). Затем во все лунки вносили по 50 мкл готового гидрозольного препарата.
2.2.7.2. Разведение 1:100.
Проводили аналогично разведению 1:25 с той лишь разницей, что в первый ряд лунок вносили 50 мкл сывороток отрицательной и положительной (без буферного раствора), а во второй ряд по 50 мкл буферного раствора с 50 мкл сывороток. Раститровку проводили начиная со второго ряда лунок по 50 мкл.
2.2.1.3. Разведение 1:10.
Проводили в стрипах. Сначала вносили 90 мкл буферного раствора, а затем 10 мкл сывороток, раститровку не делали.
2.2.8. Методы постановки реакции гидрозольной аглютинации.