Молекулярно-генетический анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников

• Автор: Логинова, Анна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : 18 ил.

СОДЕРЖАНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ген ВЯСА1 - супрессор опухолевого роста
2. Структура и функции гена ВЫСА
2.1. Структура гена ВЯСА1
2.2. Функции гена В Я СА1
2.2.1. Роль ВЯСА1 в репарации ДНК
2.2.2. РольВЯСА1 в регуляции транскрипции
2.2.3. Участие ВЯСА1 в контроле клеточного цикла
3. Механизмы злокачественной трансформации клетки при дефектах ГЕНАВ11СА1
4. Мутации в гене ВЯСА1
4.1. Общие характеристики мутаций
4.2. Номенклатура вариаций
4.3. Спектр мутаций в гене ВЯСА1
4.4. Частоты встречаемости мутаций в генах В КС А1/2
5. Полиморфизмы в гене ВЯСА1
5.1. Критерии полиморфизмов
5.2. Исследование полиморфизмов в гене ВКСА1
6. Методы идентификации мутаций

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Пациенты
2. Анализ первичной структуры гена ВИСА1
2.1. Выделение ДНК
2.2. ПЦР (полимеразная цепная реакция)
2.3. Электрофорез
2.4. Окраска геля
2.5. Секвенирование
2.6. Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Выявление особенностей первичной структуры ДНК вгенеВКСА1
2. Спектр мутаций в гене ВЯСА1 при семейном раке молочной железы
3. Спектр мутаций в гене В11СА1 при семейном раке яичников
4. Гетерогенность семей с раком молочной железы и яичников по встречаемости мутаций в гене ВЯСА1
5. Характеристика однонуклеотидных полиморфизмов вгенеВКСА1
6. ДНК-ДИАГНОСТИКА наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
выводы
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
О. е. - оптические единицы
ОНП - однонуклеотидный полиморфизм
ПААГ - полиакриламидный гель
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РМЖ - рак молочной железы
РМЖЯ - рак молочной железы и яичников
РНК - рибонуклеиновая кислота
РЯ - рак яичников
Т. п. н. - тысяч пар нуклеотидов
BSA - бычий сывороточный альбумин
СМС - метод химического расщепления некомплементарных сайтов CSGE - метод конформационно - чувствительного электрофореза DGGE - метод денатурирующего градиентного гель-электрофореза РТТ - метод тестирования неполноценного белка SDS - додецилсульфат натрия
SSCP - метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК
MBA - N,N' - метилен бисакриламид
НА - метод гетеродуплексного анализа
РСА - персульфат аммония
ТЕМЕД - N,N,N',N - тетраметил этилендиамин

По существующим данным, некоторые экзонные варианты (так называемые миссенс варианты) также могут влиять на сплайсинг РНК [Maquat 2001].
Использование метода трансляции в искусственных системах позволило продемонстрировать существенное влияние на структуру кодируемого белка ряда вариантов [Bergthorsson et.al., 2001]. В то же время, выявляемое отсутствие изменений размеров белка при искусственной трансляции не снимает вопроса о возможности иных структурно-функциональных особенностей, связанных с вариантом последовательности ДНК. Например, при варианте IVS20+47insl2 изменение белка при использовании системы трансляции не было обнаружено [Scholl et.al., 1999]. Однако более детальный анализ позволил выявить, что у носителей варианта IVS20+47insl2 в гене BRCA1 не обнаруживается продукт транскрипции одной из двух хромосом, т.е. транскрибируется только один аллель гена [Kozlowski et.al., 2000].
Следует признать, что арсенал молекулярных методов, применяемых для анализа функциональных особенностей вариантов гена BRCA1, пока невелик. Получаемые в этом направлении результаты не охватывают возможные структурнофункциональные модификации продукта гена BRCA1. В этой связи интересен подход, основанный на анализе эволюции последовательностей ДНК в гене BRCA1.
С его помощью было продемонстрировано, что количество функционально значимых вариаций в первичной структуре этого гена может быть существенно выше, чем выявлено до сих пор [Fleming et.al., 2002].
В настоящее время ведущими способами, позволяющими обнаруживать функциональную, в том числе патогенетическую значимость вариантов генов, являются генетические. Показателен пример изучения ОНП N372H в гене BRCA2.