цАМФ- и Ca2+/кальмодулин - зависимые системы фосфорилирования нейрональных белков как мишень для действия антиконвульсантов

• Автор: Савина, Татьяна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 136 с. : ил.

Список сокращений
Глава I. Обзор литературы
1.1. Модели эпилепсии на животных
1.1.1. Модели судорожной активности in vivo. Киндлинг
1.1.2. Этиология аудиогенных судорог
1.1.3. Аудиогенная эпилепсия человека
1.1.4. Модели приобретенной аудиогенной эпилесии на животных
1.1.5. Наследственные аудиогенные судороги грызунов
1.1.6. Аудиогенный киндлинг
1.1.7. Биохимические изменения мозга при аудиогенной эпилепсии
1.2. Нейробиологические основы эпилептогенеза развивающегося мозга
1.3. Участие систем вторичных посредников в механизмах эпилептогенеза
1.3.1. Сс^*/кальмодулин-зависимое фосфорширование белков
1.3.2. Внутриклеточные пути реализации сигнала, опосредуемого цАМФ.
цАМФ-зависимое фосфорилирование белков
1.3.3. Серин/треониновые протеинфосфатазы. Кальцинейрин
1.3.4. Участие систем вторичных посредников в регуляции пластичности мозга
и эпилептогенезе
1.3.5. Взаимосвязь Са}+- и цАМФ-зависимых систем вторичных
посредников
1.4. Современные стретегии применения антиконвульсантов. Мелатонин и вальпроат
натрия
Глава II. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы
2.2. Лабораторные животные
2.3. Исследование поведения крыс КМ в тесте «Открытое поле»
2.4. Оценка аудиогенной судорожной активности крыс линии КМ. Аудиогенный киндлинг
2.5. Аудиогенный киндлинг крыс КМ на фоне хронического употребления мелатонина
и вальпроата натрия
2.6. Однократное введение мелатонина половозрелым крысам линии КМ и КМ после
аудиогенного киндлинга
2.7. Однократное введение вальпроата натрия половозрелым крысам линии КМ
и КМ после аудиогенного киндлинга
2.8. Введение мелатонина крысам линии КМ в течение 7 дней с последующим
тестированием на аудиогенные судороги
2.9. Введение мелатонина крысятам линии КМ в различные сроки раннего постнатального развития (1-7,7-14 и 14-21 постнатальные дни)
2.10. Выделение структур мозга
2.11. Приготовление гомогенатов
2.12. Определение концентрации белка
2.13. In vitro фосфорилирование белков мозга
2.13.1. сАМФ- зависимое фосфорилирование
2.13.2. Са2*/кальмодулин-зависимое фосфорилирование
2.13.3. Электрофорез и идентификация белков
2.14. Измерение активностей протеинкиназ
2.14.1. Измерение активности сАМФ-зависимой протеиикиназы
2.14.2. Измерение активности С<^*/кальмодулин-зависимой протеиикиназы II
2.14.3. Оценка включения фосфата в пептидные субстраты протеинкиназ
2.15. Иммунохимические методы оценки содержания а-СаМКП, кальцинейрина и МАР2
с помощью иммунноблотинга
2.16. Электронно-микроскопические исследования
2.17. Статистическая обработка результатов исследований
Глава III. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Исследование систем Са2+/калъмодулин- и цАМФ-зависимого фосфорилирования белков в различных структурах мозга крыс линии КМ
и крыс Вистар
3.2. Исследование Са2+/кальмодулин - и цАМФ-зависимого фосфорилирования белков в различных структурах мозга крыс линии КМ через 2 суток
после однократного звукового воздействия и после АК
3.3. Исследование действия мелатонина и вальпроата натрия на активность
САМКИ и РКА
3.4. Влияние вальпроата натрия и мелатонина на аудиогенную судорожную активность крыс линии КМ и системы фосфорилирования
3.4.1. Исследование действия мелатонина (50 и 75 мг/кг) и вальпроата натрия (200 мг/кг) на аудиогенные судороги крыс линии КМ
3.4.2. Исследование действия мелатонина (50 и 75 мг/кг) и вальпроата натрия (200 мг/кг) на миоклонические судороги крыс линии КМ после аудиогенного киндлинга
3.4.3 Хроническое введение мелатонина крысам КМ в течение 7 дней с
последующим тестированием на аудиогенные судороги
3.5. Влияние хронического потребления вальпроата натрия и мелатонина крысами
КМ на аудиогенную судорожную активность во время аудиогенного
киндлинга
3.6. Исследование отставленного действия раннего постнатального введения мелатонина на аудиогенные судороги половозрелых крыс линии КМ
3.6.1. Введение мелатонина в возрасте с І-го по 7-й Р дни
3.6.2. Введение мелатонина в возрасте с 14-го по 21-й Р дни
3.6.3. Введение мелатонина в возрасте с 7-го по 14-й Р дни
Заключение
Выводы
Список литературы
Крысы КМ одной опытной и одной контрольной групп через 1 ч после введения препарата подвергались однократному звуковому воздействию для индукции судорожной активности, животные были декапитированы сразу после выхода из припадка (п=7 в каждой группе), крыс 2-х других аналогичных групп декапитировали через 1 ч после введения вальпроата натрия или физраствора без звукового воздействия (п=5 в каждой группе). Крыс КМ также подвергали АК, тестирование влияния вещества на миоклонические судороги крыс линии КМ проводили через 3 недели после последнего звукового воздействия через 1 ч после введения препарата или соответственно физраствора в контроле (п=5 в каждой группе).
2.8. Введение мелатонина крысам КМ в течение 7 дней с последующим тестированием на АС.
Крысам линии КМ 3-х месячного возраста в течении 7 дней внутрибрюшинно вводили свежеприготовленный раствор мелатонина в дозе 50 мг/кг (п=5) между 10 и 11 ч. Мелатонин растворяли как описано в пп. 2.6. Контрольной группе животных вводился физраствор с 10% спиртом в том же соотношении, что и опытной. Судорожную активность у крыс опытных и контрольных групп вызывали однократным звуковым воздействием через 2 суток после последнего введения препарата.
2.9. Введение мелатонина крысятам линии КМ в различные сроки раннего постнатального развития (1-7, 7-14 и 14-21 постнатальные дни).
Мелатонин растворяли в этиловом спирте-ректификате и доводили физраствором до конечной концентрации 10 мг/мл. Свежеприготовленный раствор мелатонина вводили крысятам линии КМ подкожно в область холки в дозе 50 мг/кг в утреннее время (между 10-11ч) в разные сроки после рождения: с 1-го по 7-ой (п=10 в опытной группе и п=9 в контроле), 7-14 (п=10 в опытной группе и п=9 в контроле) и 14-21 (п=7 в опытной группе и п=9 в контрольной) дни постнатального развития. Контрольной группе вводили соответственно физраствор с этанолом в том же объеме. День рождения помета считался нулевым. В опытную и контрольную группы брали самцов из одного и того же помета (7-14 и 14-21 дни введения), либо из разных пометов (группа 1-7 дни введения). Все крысята метились с помощью спиртового раствора бриллиантового зеленого. Различий в приросте веса животных и уровне выживаемости между опытными и контрольными группами в течение эксперимента не наблюдалось, однако и опытная, и контрольная группа введения мелатонина с 1 по 7 постнатальный день отличались высокой смертностью крысят (около 40%). В возрасте 3-х месяцев крыс всех экспериментальных групп подвергали АК. Еще 2-