Изучение протекторного действия бактерий рода Klebsiella на газонные травы в условиях засоления почвы

• Автор: Соколова, Анна Ярославна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 145 с. : ил.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Техногенное загрязнение окружающей среды
1.2 Влияние засоления на высшие растения
1.2.1 Бактериально-растительное взаимодействие у
высших растений
1.3 Влияние засоления на микроорганизмы
1.4 Представители семейства Enterobacteriaceae
как возможные протекторы солевых стрессов
у растений
Глава 2 ОБЪЕКТЫ, МЕТОДЫ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ
ЭКСПЕРЕМЕНТОВ
f.- 2.1.1 Объекты исследования
2.1.2 Характеристика культур
2.2 Методы исследований
2.2.1 Методы культивирования бактерий и
питательные среды
2.2.2 Определение коэффициента насыщенности,
показателя текучести клеточных мембран и
* состава жирных кислот бактерий Klebsiella
planticola штамма ТСХА-91 и штамма ТСХА-91 Rif200
2.2.3 Микроскопические методы исследования
Атомно-силовая микроскопия бактериальных клеток Klebsiella planticola и Klebsiella pneumoniae
Методика определения всхожести семян, длины наибольшего листа и корней газонных трав по фону засоления (модельный опыт 1)
Методика определения аскорбиновой кислоты в проростках газонных трав при инокуляции семян растений Klebsiella planticola по фону засоления (модельный опыт №2)
Методика определения всхожести семян, длины наибольшего листа и корней газонных трав при инокуляции семян растений бактериями Klebsiella planticola и Klebsiella pneumoniae по фонуе засоления (модельный опыт №3)
Методика определения всхожести семян, длины наибольшего листа и корней газонных трав при инокуляции семян растений Klebsiella planticola по фону внесения регуляторов роста и засоления (модельный опыт №4)
Методика проведения вегетационного опыта по определению выживаемости бактерий Klebsiella planticola в фитоплане газонных трав при почвенном засолении
Методика по изучению влияния Klebsiella planticola на содержание кадмия в корнях и листьях капусты китайской сорта Ласточка по фону засоления и повышенной концентрации кадмия в почве

2.2.10 Цитофотометрический анализ клеток апикальной
меристемы корня райграса пастбищного сорта Дуэт при инокуляции растений Klebsiella planücola по фону различных концентраций хлорида натрия (модельный опыт №5)
2.2.11 Определение митотического индекса в меристеме
корней райграса пастбищного сорт Дуэт при действии Klebsiella plant/cola штамм ТСХА-91 в условиях засоления (модельный опыт 6)
2.2.12 Изучение некоторых иммунобиологических
свойств Klebsiella planticola штамм ТСХА-91 и Klebsiella pneumoniae
2 2 13 Статистическая обработка экспериментальных
данных
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ
3.1 Определение коэффициента насыщенности,
показателя текучести клеточных мембран и состава жирных кислот бактерий Klebsiella planticola штамма ТСХА-91 и штамма ТСХА-91 Rif200
3.1.2 Атомно-силовая микроскопия бактериальных
клеток Klebsiella planticola и Klebsiella pneumoniae
3.2 Изучение действия бактерий рода Klebsiella
planticola и Klebsiella pneumoniae, а также регуляторов роста на всхожесть, рост и
развитие газонных трав в условиях засоления
K2 SO4 - 1г/л, MgSÜ4*7 Н20 - 0,25 г., NaCl - 2 г/л, сахароза - 20 г/л, экстракт хлебопекарных дрожжей 60 мл., агар-агар 30 г/л, вода-940мл.,рН - 6.7 (Мирошниченко И В , 1980)
2.2.2. Определение коэффициента насыщенности, показателя текучести клеточных мембран и состава жирных кислот бактерий Klebsiella planticola штамма ТСХА-91 и штамма ТСХЛ-91 Rif00
Выявить устойчивость микроорганизма к действию различных ксенобиотиков и к стрессорным условиям окружающей среды, возможно при определении коэффициента (степени) насыщенности жирных кислот и показателю текучести клеточных мембран (Loffhagen N. et al., 1995). Для определения данных показателей необходимо было изучить спектр жирных кислот Klebsiella planticola штаммов ТСХА-91 и ТСХА-91 Rif00.
Штаммы ТСХА-91 и ТСХА-91 Rif200 Klebsiella planticola, культивировали на твердой питательной среде LB в течение 24 часов.
Для хроматографического анализа жирных кислот Klebsiella planticola микробные клетки смывали с агара в количестве 40-60 мг, подвергали кислому метанолизу в 0,4 мл IM НС1 в метаноле при 80°С в течение 1 часа. В результате метанолиза жирные кислоты освобождаются из липидов клеточной мембраны и липополисахаридов клеточной стенки в виде метиловых эфиров. Последний двукратно экстрагировали в 200 мкл. гексана и упаривали до 60 мкл. Полученную порцию экстракта анализировали на хроматографе Microbial Identification System (Sherlock) фирмы MIDI Inc, Newark, Del, США (Stead D.E. et al., 1992). Причем одновременно, в автоматическом режиме, по программе хроматографа Microbial Identification System (Sherlock), происходило определение вида микроорганизмов Также, в автоматическом режиме по банку данных хроматографа, проводилось сопоставление полученного профиля жирных кислот с базой данных прибора, включающей около 2000 штаммов микроорганизмов, в том числе семейства Enterobacteriaceae и определение филогенетического сходства исследуемых микроорганизмов.