Иммунотоксины, полученные на основе моно- и поликлональных антител и А-цепи рицина

• Автор: Тоневицкий, Александр Григорьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 c. : ил

ГЛАВА I. ШЛУНОТОКСИШ. Обзор литературы
1.1..Использование антител в качестве векторов иммунотоксинов
1.1.1. Особенности использования поликлональных антител, ИХ F(ab)2~ и Fab-фрагментов . 10—II
1.1.2. Новые возможности, связанные с применением моноклональных антител
1.2. Токсины, использующиеся для конъюгации с антителами
1.2.1. Преимущества токсинов белковой природы
1.2.2. Структура белковых токсинов
1.2.3. Механизм действия токсинов
1.3. Методы конъюгации белковых токсинов и антител
1.3.1. Методы конъюгирования целых токсинов и антител
1.3.2. Методы получения конъюгатов, содержащих A-цепь токсинов
1.3.3. Другие способы получения иммунотоксинов
1.4. Механизм проникновения внутрь клетки А-це1.5. Изучение действия иммунотоксинов в культуре клеток
1.5.1. Действие ИТ, содержащих антитела к целым
клеткам

1.5.2. Цитотоксические свойства ИТ, содержащих поликлональные антитела к антигенам клеточной поверхности
1.5.3. Ингибирующая активность ИТ, содержащих моноклональные антитела к отдельным цепям 1д и искусственным антигенам, расположенным на поверхности клеток-мишеней
1.5.4. Действие ИТ, содержащих моноклональные антитела к опухолево-специфическим, днф-ференцировочным и другим антигенам
1.6. Использование иммунотоксинов для ингибирования опухолевого роста
1.6.1. Удаление опухолевых клеток из смеси обработкой ИТ с последующим возвращением
донору
1.6.2. Действие ИТ на раковые клетки у безтимусных мышей
1.6.3. Применение ИТ цри прямом подавлении роста опухоли
1.7. Модуляция специфического иммунного ответа с помощью иммунотоксина
1.8. Что ограничивает эффективность действия иммунотоксинов
1.9. Заключение
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Получение рицина и его А- и В-цепей

2.2. Получение препаратов антител для конъюгации с А-цепыо рицина
2.2.1. Поликлональные антитела к клеткам миеломы Х-63
2.2.2. Поликлональные антитела к ь -цепягл 1дс человека
2.2.3. Моноклональные антитела к диффюренциро-вочному антигену эритробластов мыши
2.3. Поликлональные антитела к А- и В-цепям
рицина
2.3.1. Получение иммуносорбентов
2.4. Получение конъюгата между А-цепью рицина и антителами
2.5. Определение цитотоксических свойств полученных препаратов рицина, его изолированных субъединиц, антител и конъюгатов
2.5.1. Подавление роста клеток в культуре
2.5.2. Ингибирование включения -лещина в белки, синтезируемые клетками-мишенями
2.5.3. Подавление роста колоний
2.6. Анализ распределения популяции клеток-мишеней по клеточному циклу
2.7. Иммунофлюоресценция
2.8. Бесклеточная белок синтезирующая система
из ретикулоцитов кролика
Глава III. ПОЛУЧЕНИЕ КОНЪЮГАТОВ МЕЦВУ А-ЦЕПЬЮ РИЦИНА И
АНТИТЕЛАМИ

к этому AT, и РА. Полученные результаты представлены на Рис. I.
В работе / 59 / изучали ингибирующее действие конъюгата ДТД и моноАТ к специфическому поверхностному протеогликану клеток меланомы M2I человека. Беетимусным мышам balb/c (au/nu) вве-

ли 1-1,5 х 10 клеток меланомы M2I. Через 3 дня и затем с трехдневным интервалом внутрибрюшинно вводили 40 мкг конъюгата или только АТ. Ингибирующее действие определяли путем измерения линейных размеров опухоли. Полученные результаты представлены на Рис. 2. Видно, что специфическое ингибирующее действие оказывают и ИТ, и АТ.
1.6.3. Применение ИТ при прямом подавлении роста опухоли
Беетимусные животные представляют собой удобную лабораторную модель для изучения различных свойств ИТ. Однако, по-видимому, не все результаты, полученные в этих опытах, распространяются на нормальных животных. Это существенно ограничивает возможности данной модельной системы. Наибольший интерес представляют опыты, выполненные на нормальных животных. Первая попытка применения конъюгата АТ и токсина для подавления опухолевого роста описана в / 29 /. Поликлональные АТ к ДНФ конъюгировали с ДТ. Вводили хомякам метки саркомы с ДНФ-группами на поверхности, а затем - ИТ. Обработка конъюгатом задерживает рост и уменьшает распространение опухоли, что увеличивает время жизни животных. Эти же авторы / 27 / впервые применили и ИТ против естественных опухолево-специфичных АГ. Поликлональные АТ против клеток саркомы и против лимфомы хомяка, трансформированных вирусом sv-40,конъюгировали с ДТ. Одиночная доза ИТ давала лишь