Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа при старении эритроцитов

• Автор: Лакомая, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 112 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Особенности энергетического обмена ретикулоцитов и эритроцитов
1.2. Пентозофосфатный путь
1.3. Нормальный и напряженный эритропоэз
1.4. Старение эритроцитов
1.5. Характеристика глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
Заключение
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объект исследования
2.2. Фракционирование эритроцитов
2.3. Подсчет ретикулоцитов
2.4. Определение гемоглобина
2.5. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.6. Определение температурной зависимости глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.7. Определение рН-зависимости глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы39
2.8. Характеристика основных кинетических параметров
2.9. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изменение свойств глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при старении эритроцитов, образованных в условиях нормального эритропоэз а

3.2. Изменение свойств глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при старении эритроцитов, образованных после стресс-воздействия (массивной кровопотери)
3.2.1. Активность и кинетические параметры глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на 7 сутки после кровопотери
3.2.2. Активность и кинетические параметры глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в разных фракциях эритроцитов на 20 сутки после кровопотери
3.2.3. Активность и кинетические параметры глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на 30 сутки после кровопотери
3.3. Влияние температуры и pH среды на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов, образованных в условиях нормального и напряженного эритропоэза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФК - активные формы кислорода
Г6ФД - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
Г6Ф - глюкозо-6-фосфат
ГК - гексокиназа
ДФГМ - дифосфоглицераткиназа
2,3 - дифосфоглицерат
Км - константа Михаэлиса
К, - константа ингибирования
оэм - общая эритроцитарная масса
ФГК - фосфоглицераткиназа
ФМЭ - фракция молодых эритроцитов
ФСЭ - фракция старых эритроцитов
ФФК - фосфофруктокиназа
П„ - коэффициент Хилла
^шах - максимальная скорость

показано, что выделение и очистка фермента приводит к изменению его свойств. Так у Г6ФД теряются кооперативные свойства, которые возвращаются при высоких значениях pH, ионной силе и концентрациях Г6Ф (Kirkman H.N. et al., 1980; Kirkman H.N., Gaetani G.F., 1986; Adediran S.A., 1988). Поэтому изучение кинетических свойств фермента в гемолизатах позволяет проследить то поведение фермента, которое более приближено к его поведению внутри клетки.
Известно, что НАДФН является конкурентным ингибитором Г6ФД (Корниш-Боуден Э., 1978; Диксон М. , Уэбб Э., 1982) однако не изучено его влияние на фермент в эритроцитах разного возраста.
Для определения влияния НАДФН на скорость реакции в разных фракциях эритроцитов у интактных кроликов кривые зависимости скорости от концентрации НЛДФ* при различных концентрациях НАДФН проанализировали в координатах Лайнуивера-Берка (рис.11).
М[ НАДФ+], мкМ'1
Рис.11. Зависимость скорости ГбФД-ной реакции от концентрации НАДФ+ при разных концентрациях НАДФН во фракции молодых эритроцитов у интактных кроликов.