Свойства 4/1-подобных белков растений - возможных факторов внутри- и межклеточного транспорта

• Автор: Минина, Елена Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Внутриклеточный транспорт
1.1 Экзоцитоз
1.2 Эндоциоз
1.3 Регуляция внутриклеточного транспорта
1.4 Внутриклеточный транспорт к плазмодесмам
2. Межклеточный транспорт
2.1 Типы плазмодесм
2.2 Структура плазмодесм
2.3 Транспорт через плазмодесмы
2.3.1 Заякоривание около ПД
2.3.2 Транслокация через плазмодесмы
2.3.3 Высвобождение из плазмодесмы в соседней клетке
2.4 Регуляция межклеточного транспорта.
2.4.1. Предельная пропускная способность плазмодесм
2.4.2 Роль цитоскелета в регуляции межклеточного
транспорта
2.4.3 Роль постгранскрипционных модификаций в регуляции
транспорта белков
2.5 Специфичность транспорта макромолекул в растениях и
его регуляция
3. Белок 4/1 АтЫДоряк 1каНапа
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1 Поиск гомологов белка 4/1 АгаЫсЬрзк МаИапа т иШсо
2 Иммунодетекция белка4/1 ЛгаШо/лш 1каИапа и его
гомологов.
3 Клонирование кДНК гомологов белка 4/1 из растений
Мсойапа Ьеп(Иат1ста и ШсоИапа 1аЪасит методом
КАСЕ-РСЯ
4 Клонирование полных копий генов гомологов белка 4/1
из растений МсоНапа ЬешИатгапа и МкоНапа 1аЬасит
5 Изучение внутриклеточной локализации белка 4/1
5.1 Внутриклеточная локализация белка 4/1, слитого с вРР
5.2. Ко-локализация белка 4/1 с маркером ЭПР
5.3. Ко-локалзация белка 4/1 с акгиновыми филаментами
5.4. Ко-локализация белка 4/1 с маркером аппарата Гольджи
5.5. Мутационное картирование участков белка 4/1,

ответственных за его внутриклеточную локализацию.
6. Поиск белков-партнеров белка 4/1 с помощью
дрожжевой двугибридной системы
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Названия вирусов
ВБТ - вирус бронзовости томата ВТМ - вирус табачной мозаики ВОМ - вирус огуречной мозаики
Другие сокращения
ERGIC - промежуточный компартмент ЭПР-АГ
DTT - дитиотреитол
GFP - зеленый флуоресцирующий белок
YFP - желтый флуоресцирующий белок
IPTG - изопропил- 1-тио-(3-£)-галактозид
NCAP не клеточные автономные белки
PTS - сигнал транспорта к плазмодесме
X-Gal - 5-бром-4-хлор-3-индолил-|3-2}-галактозид
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
АТФ - аденозинтрифосфат
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
мРНК - информационная РНК
РНК - рибонуклеиновая кислота
РНП - рибонуклеопротеиновый комплекс
ТБГ - тройной блок транспортных генов
ТБ - транспортный белок
ППС - предельная пропускная способность
ПВК - превакуолярный компартмент
ПД - плазмодесма
ЭПР - эндоплазматический ретикулум АГ - аппарат Гольджи СТГ - сеть транс-Гольджи

специфичность к транслокации тех или иных молекул, все эти свойства определяют ход развития растения.
Наиболее важными вопросами на данный момент остаются: какие молекулярные сигналы способствуют открытию и закрытию плазмодесм, какие структурные элементы плазмодесм являются эффекторами этих сигналов.
3. Белок 4/1 Arabidopsis thaliana.
Целью данной работы было изучение свойств белка 4/1 A. lhaliana и его гомологов, предположительно участвующих в процессе межклеточного транспорта вирусов в растениях.
Белок 4/1 был обнаружен при скрининге кДНК библиотеки Arabidopsis thaliana, против белка Nsm - транспортного вируса бронзовости томата (ВБТ) (von Bargen et al,2001).
Анализ последовательности мРНК белка 4/1, имеющейся в электронных базах данных, показал, что белок 4/1 является набольшим гидрофильным полипептидом длиной 247 аминокислотных остатков с предсказанной молекулярной массой 29,1 кД. При сравпении аминокислотной последовательности белка 4/1 с последовательностями других белков, не было выявлено наличие у этого белка каких-либо известных функциональных доменов. Однако было показано относительное сходство этого белка с миозином а также транскрипционными факторами растений, содержащими консервативный мотив MADS-box. Известно, что MADS-box- содержащие белки способны к автономному транспорту через плазмодесмы растения (Hake and Char, 1997).
Взаимодействие белка 4/1 с транспортным белком ВБТ в условиях дрожжевой двугибридной системы, позволило сделать предположение, о вероятном участии этого белка в механизме межклеточного транспорта.