Фотоконверсия окрашенных белков из коралловых полипов

• Автор: Чудаков, Дмитрий Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Флуоресцентные и окрашенные вЕРподобные белки кишечнополостных

1.2. Использование вЕРподобных белков для изучения подвижности клеток, клеточных белков и органелл

ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Механизм фотоактивации флуоресценции белка аБиЮР

2.2. Применение фотоактивируемых флуоресцентных белков в биотехнологии

2.3. Обсуждение

2.4. Заключение

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Материалы и оборудование
3.2. Методы исследования
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


i . К году число публикаций, включающих термин или i в названиях или абстрактах превышало 0, к году , а к моменту написания настоящей работы уже превышало цифру в тысяч публикаций, если учитывать только результаты поиска в системе . Сегодня интенсивнейшим образом используется для флуоресцентного мечения белков, органелл, клеток и организмов в широком диапазоне видов прокариот и эукариот. В отличие от других природных пигментов, и известные подобные белки формируют внутренний хромофор без каких бы то ни было вспомогательных кофакторов i . i . Эти маркеры могут быть использованы без нарушения целостности объектов i . i . Дикий тип имеет основной пик возбуждения флуоресценции при 6 нм, и минорный при 6 нм рис. При этом спектры эмиссии флуоресценции для этих двух пиков очень близки с максимумами при 3 и 8 нм , i, iv, . Исследования физических и химических свойств выявили несколько важных характеристик, относящихся непосредственно к структуре белка. чрезвычайно устойчив к денатурации, для которой необходимо поместить белок в 6М гуанидин при С либо вывести значение за границы между 4. Ренатурация практически полная или частичная происходит в течение нескольких минут после нейтрализации денатурирующих условий , , . В пределах недснатурирующих значений , возрастание приводит к падению пика возбуждения флуоресценции при 6 нм, и возрастанию пика при 6 нм . После кристаллизации практически не изменяет своих флуоресцентных свойств, если сравнивать с в водном растворе . Поэтому выяснение трехмерной структуры методом рентгеноструктурного анализа, результаты которого были почти синхронно опубликованы в двух работах года . . Более того, последующие разработки флуоресцентных белков с различными свойствами во многом опирались и опираются именно на предсказуемые по трехмерным моделям изменения в структуре . Рисунок 1. Структура СРР н спектры возбужденияэмиссия флуоресценции. РР с регулярным расположением рслоев на внешней стороне цилиндра. В центральной части молекулы модифицированный остаток тирозина и дополнительный цикл, образованный циклизацией пептидного остова части аспирального сегмента, образуют хромофор. Аминокислотные остатки рслоев, обращенные внутрь рбочки, формируют микроокружение хромофора, поляризуя его и обеспечивая его планарность. В результате, хромофор СП5 способен к эффективной флуоресценции, спектры возбужденияэмиссии которой для белка дикого типа показаны на рисунке. представляет собой Цилиндр этот имеет диаметр около и длину около . Флуоресцентный центр молекулы модифицированный остаток тирозина и дополнительный цикл, образованный циклизацией пептидного остова части аспирального сегмента. Небольшие аспиральные участки также закрывают бочонок с торцов, Анализ гексапептида, полученного протеолизом очищенного , позволил ещ в году предсказать, что хромофор образован внутренней последовательностью аминокислот , которая посттрансляционно модифицируется с образованием дополнительного цикла из пептидной цепи белка рис. , . Исследования экспрессии в . и , с образованием имидазольного кольца, и вторую, более медленную часы, стадию окисления Тирбб i . Последующие работы по мутагенезу v . i . . в положении строго необходим для формирования хромофора. По всей вероятности, такая консервативность позиции определяется необходимостью тесного сближения атомов пептидной цепи. Однако, среди белков с известной трехмерной структурой, содержащих последовательность , в из 6 белков степень сближенности атомов пептидного остова соответствует таковой у данные за год ii . Таким образом, стерические условия выполнены, но, тем не менее, циклизации не происходит.