Фрагменты гемоглобина, стимулирующие пролиферацию нормальных и трансформированных клеток млекопитающих in vitro

• Автор: Сазонова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 182 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
рБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Пролиферация клеток и ее регуляция
Понятие пролиферативного процесса
Регуляция клеточного цикла
Заключение
Сигнальные вещества, принимающие участие в регуляции пролиферации, и особенности их
действия
Факторы роста (ФР)
Пептидные гормоны
Нейропептиды
Пито кипы
Заключение
Дополнительные пути регуляции пролиферации клеток в организме млекопитающих
Заключение
РЕЗУЛЬТАТЫ
Сравнение способности С-концевых фрагментов ос-цепи гемоглобина влиять на пролиферацию
КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК РАЗЛИЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ в УСЛОВИЯХ дефицита сыворотки
Сравнение активности пептидов из участка (133-141) а-гемоглобина в отношении опухолевых
фибробластов мыши L929
Сравнение активности отдельных представителей группы пеокиоторфина в отношении
клеточных культур различного происхождения
Изучение способности С-концепых фрагментов ст-цепи гемоглобина поддерживать
ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ КЛЕТОК РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ В УСЛОВИЯХ ЛИШЕНИЯ СЫВОРОТКИ
Исследование поддерживающего эффекта С-концевых фрагментов a-цепи гемоглобина в
отношении трансформированных клеток
Изучение эффектов С-концевых фрагментов a-цепи гемоглобина на переживающих культурах
клеток из селезенки и костного мозга мыши
Исследование зависимости эффектов фрагментов С-концевого участка a-цепи гемоглобина
ОТ СОДЕРЖАНИЯ фетальной сыворотки в среде
Активность неокиоторфина в отсутствие ростовых факторов фетальной сыворотки в среде.. 94 Сравнение активности пеокиоторфина и пептида TPZTSKYR в условиях дефицита фетальной
сыворотки и при ее оптимальном содержании
Передача пролиферативного сигнала под действием неокиоторфина
Активность неокиоторфина в присутствии модуляторов внутриклеточной передачи
пролиферативного стимула
Заключение
Моделирование эндогенных функций представителей семейства коротких С-концевых
ФРАГМЕНТОВ А-ЦЕПИ ГЕМОГЛОБИНА
Сравнение активности пептидов группы неокиоторфина с активностью регуляторных пептидов

Изучение зависимости эффекта С-концевых фрагментов а-глобипа от исходной плотности
клеток и содержания фетальной сыворотки
Изучение совместного действия неокиоторфина и представителей тканеспецифических пептидных комплексов, обладающих антипролиферативной активностью
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Используемые вещества
Используемые культуры клеток
Характеристика культур и рутинная культивация
Выделение и культивирование эмбриональных фибробластов мыши (МЕР)
Выделение спленоцитовмыши
Выделение клеток костного мозга мыши

Используемые методики оценки измеие1Шя количества клеток в образцах
Метод окрашивания красителем сульфородамин Б
Окрашивание МТТ
Оценка количества клеток в образце визуаьльньш подсчетом клеток под микроскопом в
присутствии красителя Трипаповый синий
Метод оценки количества клеток в образце с помощью флуоресцентной микроскопии
ф Метод оценки количества клеток в образце с помощью универсального счетчика частиц BeckmanCoulterZ2
Статистическая обработка результатов
Тестирование активности тест-веществ на культурах клеток
Анализ содержания ДНК в клетках методом проточной флуориметрии
Оценка размера клеток с использованием метода проточной флуориметрии
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
поверхности, в частности, структура НЭРв в случае БОБ [27,116]).
Приобретение резистентности клеток-мишеней к ФР. Одним из ответов клетки на воздействие ФР часто является понижение ее чувствительности к подействовавшему на нее ФР (приобретение резистентности). Резистентность может быть частичной либо полной и обратимой либо необратимой. Приобретение резистентноти можно рассматривать, как частный случай потери восприимчивости к ФР (см. ниже), когда данная потеря индуцирована тем же фактором.
При запуске большинства сигнальных каскадов в клетке, как правило, срабатывает механизм обратной отрицательной связи, ведущий к ослаблению способности этого каскада активироваться; так, активированные ЕЯК1/2 и ЯЭК фосфорилируют СТР-обменивающий белок Зоэ, подавляя тем самым запуск МАРК/ЕШС-каскада (см. выше).
Полная обратимая резистентность достигается через фосфорилирование и/или убиквитинилирование рецепторов ФР и их деградацию в эндосомах [23,24]. В этом случае может меняться не только чувствительность к подействовавшему фактору (при интернализации и лизисе лиганд-рецепторного комплекса), но и восприимчивость к другим факторам, при неспецифической деградации рецепторов ФР в активированной клетке [103]. Приобретение необратимой резистентности клеток к ФР возможно при подавлении экспрессии рецептора подействовавшего ФР в ответ на его связывание с рецептором.
Изменение восприимчивости к ФР. Изменение восприимчивости к ФР - это приобретение/потеря способности клетки связывать какой-либо ФР после воздействия на клетку другого ФР. Потери клеткой способности связывать ФР, который с ней связался и подействовал, называется приобретением резистентности (см. выше). Изменение восприимчивости может быть достигнуто модификацией структуры рецептора. Примером может служить трансмодуляция рецепторов ЕвР, вызванная с помощью РБСР в линии фибробластов Бгмаз/ЗТЗ, которая понижает способность клеток связывать ЕвР [103]. Другой способ шменения восприимчивости - изменение уровня экспрессии рецептора к ФР, индуцированное другим ФР: в клетках Бмдзз/ЗТЗ понижается экспрессия а-субъединицы рецптора РИСР после их обработки ТвР-Р [103], Ь-РСБ повышает экспрессию рецепторов УЕвР (фактор роста эндотелиальных клеток сосудов) в клетках эндотелия сосудов [121, 122], ТСР-Р1 повышает экспрессию рецепторов к РвР в культуре клеток легочных фибробластов человека [123].