Нейропсихотропные свойства веществ пептидной природы, влияющих на систему факторов роста нервной ткани

• Автор: Елизарова, Ольга Сергеевна
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 181 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Мозговой нейротрофический фактор

1.2. Эритропоэтин человека

1.3. Подходы, используемые при создании лекарственных средств на основе эндогенных нейротропных пептидов

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Препараты и вещества, используемые в исследовании

2.2. Животные используемые в исследовании

2.3. Получение наносомальной формы эритропоэтина

2.3.1. Метод получения полимерных наночастиц на основе
полилактидов
2.3.2 Сорбция веществ на полимерных наночастицах
2.3.3 Метод определения размеров и полидисперсности наночастиц
2.3.4 Методы визуализации наночастиц
2.3.5. Методика определения степени включения эритропоэтина в
наночастицы
2.3.4. Метод определения степени десорбции эритропоэтина в присутствии различных ПАВ
2.3.5. Метод определения агрегационной устойчивости коллоидной системы
2.4. Метод определения проницаемости ГЭБ для наночастиц
2.5. Изучение антиамнестического действия веществ
2.5.1 Методика обучения условной реакции пассивного избегания
2.5.2. Амнезия условной реакции пассивного избегания, вызванная
максимальным электрошоком
2.5.3. Амнезия условной реакции пассивного избегания, вызванная
скополамином
2.6. Водный лабиринт Морриса
2.7.Моделирование депрессивноподобных состояний
2.7.1. Тест вынужденного плавания по Порсолту
2.7.2. Тест подвешивания за хвост
2.8. Моделирование гипоксии
2.8.1. Гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме
2.8.2. Гипобарическая гипоксия
2.8.3. Гемическая гипоксия
2.9. Исследование влияния веществ на неврологический статус животных
2.9.1 Шкала Stroke-index McGrow
2.9.2. Подтягивание на горизонтальной перекладине
2.10. Исследование координации движений в тесте вращающегося стержня
2.11. Метод приподнятого крестообразного лабиринта
2.12. Оценка ориентировочно-исследовательского поведения и двигательной активности в открытом поле

2.13. Изучение нейропротективных свойств веществ
2.13.1. Модель геморрагического инсульта
2.13.2. Метод морфометрического определения объема зоны повреждения мозга
2.13.3. Метод МРТ-исследования мозга
2.13.4. Модель болезни Альцгеймера, вызванной внутрижелудочковым введением амилоида
2.14. Метод определения влияния веществ на эритропоэз
2.15. Метод изучения острой токсичности веществ
2.16. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Нсйропсихотропные свойства ГСБ-106, дипеитидного миметика 67 ВИОТ
3.1. Исследование нейропротекторных свойств ГСБ-106 на модели
геморрагического инсульта
3.1.1. Исследование динамики выживания крыс с ИПГ
3.1.2. Исследование неврологического дефицита у крыс с ИПГ
3.1.3. Изучение влияния ГСБ-106 на координацию движений у крыс в тесте вращающегося стерженя
3.1.4. Изучение влияния ГСБ-106 на ориентировочно-исследовательское поведение и двигательную активность у крыс с ИПГ в открытом поле
3.1.5. Изучение влияния ГСБ-106 на поведение крыс с ИПГ в тесте приподнятого крестообразного лабиринта
3.1.6. Изучение влияния ГСБ-106 на обучение УРИИ у крыс с

3.2. Изучение нейропротективных свойств ГСБ-106 в водном лабиринте Морриса на модели болезни Альцгеймера, вызванной внутрижелудочковым введением амилоида
3.3. Изучение антидепрессивных свойств ГСБ
3.3.1. Изучение антидепрессивных свойств ГСБ-106 на модели вынужденного плавания по Порсолту
3.3.2. Изучение антидепрессивных свойств ГСБ-106 в тесте «подвешивание за хвост»
3.4. Изучение антиамнестических свойств ГСБ
3.4.1. Изучение антиамнестических свойств ГСБ-106 на модели амнезии УРИИ, вызванной скополамином
3.4.2. Изучение антиамнестических свойств ГСБ-106 на модели амнезии УРИИ, вызванной МЭШ
3.5. Изучение противогипоксических свойств ГСБ
3.5.1. Изучение противогипоксической активности ГСБ-106 на модели
гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме
3.5.2. Изучение противогипоксической активности ГСБ-106 на модели
гипобарической гипоксии с «подъемом» на высоту 10000 м
3.5.3. Изучение противогипоксической активности ГСБ-106 на модели

гемической гипоксии
Глава 4. Исследование наносомальной формы эритропоэтина
4.1. Изучение проникновения РЬОА наночастиц через гемато-эн цефалический барьер
4.2. Получение полимерных наночастиц
4.3. Визуализация наночастиц методами электронной и атомно-силовой микроскопии
4.4. Сорбция эритропоэтина на полилактидных наночастицах и оценка физикохимических свойств полученной наносомальной
формы
4.5. Изучение нейропсихотропных свойств наносомального эритропоэтина
4.5.1. Исследование нейропротекторных свойств наносомального эритропоэтина на модели интрацеребральной посттравматической
гематомы
4.5.2 Изучение нейропротективных свойств наносомального эритропоэтина в водном лабиринте Морриса на модели болезни Альцгеймера, вызванной
внутрижелудочковым введением амилоида-В
4.5.3. Изучение антиамнестических свойств наносомального эритропоэтина
4.6. Изучение острой токсичности нсРЭЧ, сорбированного на Р1ХЗА наночастицах
4.7. Изучение влияния нсРЭЧ, сорбированного на РЬОА наночастицах на эритропоэз
Обсуяедение результатов
Заключение
Выводы
Список сокращений и условных обозначений
Список литературы

тирозина субъединицу соседнего рецептора вблизи каталитического участка, фосфорилированный димер активирует каскад сигнальных путей препятствующий апоптозу (Youssoufian H. et al., 1993; Jelkmann W., 2007).
ЭПОР взрослого человека представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 52,6 кДа, состоит из 484 аминокислот (Elliot S. et al., 2006). В большей степени взаимодействие ЭПО/ЭПОР происходит в гидрофобной области ЭПОР (Phe93, Met150, Phe205) (Livnah О. et al., 1996). После аутофосфорилирования молекулярная масса ЭПОР увеличивается до 60 кДа (Elliot S. et al., 2006). В эритропоэтинчувствительных клетках запускается фосфорилирование ключевых молекул, ответственных за их пролиферацию и дифференциацию: сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции (STAT5), фосфатидилинозитол-З-киназа/Akt, митогенактивирующая протеинкиназа (МАР) и протеинкиназа С (Yoshimura А. & Misawa H., 1998; Constantinescu S.N. et al., 2001). Дефосфорилирование Jak2 под действием гемопоэтической клеточной фосфатазы (НСР) возвращает ЭПОР в неактивное состояние (Yi Т. et al., 1995; Klingmuller U. et al., 1995). Было показано, что примерно через 90 минут после взаимодействия ЭПО/ЭПОР, происходит деактивация ЭПОР и интернализация ЭПО внутрь клетки (Mufson P.A. & Gesner T.G., 1987), причем, в гемопоэтических клетках около 60% интернализованного ЭПО затем секретируются обратно, а 40% подвергаются деградации (Gross A.W. & Lodish H.F., 2006). Мутации в С-терминальных участках цитоплазматического домена ЭПОР или функциональная недостаточность НСР приводят к эритроцитозу (Kralovics R. & Prchal 2001).
Обнаружено, что мРНК ЭПОР экспрессируется так же в различных некроветворных тканях, таких как эндотелий сосудов, нервные клетки и плацента (D’Andrea A.D. & Zon LI. 1990), в периферической нервной системе его экспрессия обнаружена на миелиновых волокнах корешковых нервов (Hassan, K. et al., 2004). Кроме того, ЭПОР экспрессируется в кардиомиоцитах у взрослого человека (Depping R. et al., 2005).
Нейротропные эффекты эритропоэтипа
На физиологическую, некроветворную функцию молекул эритропоэтина указывает
важность его воздействия на структуры головного мозга развивающегося организма. У мышей, страдающих дефицитом РЭПО, выявлены нарушения развития ГМ - гипоплазия района 4-го желудочка, увеличенный апоптоз нейронов (Yu X. et al., 2001). В ткани ГМ плода человека с 8-й по 24-ю неделю гестации имеет место экспрессия эритропоэтиновой иРНК и мРНК ЭПОР. При этом нейроны плода отвечают двойным усилением экспрессии иРНК ЭПО на гипоксические воздействия (Juul S.E. et al., 1999; Juul S.E. et al., 2004). На «нокаутированных» животных в отношении гена ЭПО или ЭПОР установлена генотипически обусловленная эмбриональная