Роль внутриклеточных протеолитических систем в развитии и прогнозе рака эндометрия

• Автор: Коваль, Валерия Денисовна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 139 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1 Современные представления о патогенезе рака эндометрия

1.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в развитии рака эндометрия

1.2.1 Характеристика убиквитин-протеасомной системы

1.2.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в патогенезе рака эндометрия

1.3 Роль кальпаинов в развитии рака эндометрия

1.3.1 Характеристика кальпаиновой системы

1.3.2 Роль кальпаинов в патогенезе рака эндометрия
1.4 Белки, ассоциированные с клеточной подвижностью, их роль в инвазии и метастазировании и связь с внутриклеточными протеиназами
1.5 Молекулярные маркеры рака эндометрия и онкологического риска при гиперплазии эндометрия
Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования
2.1 Клиническая характеристика больных
2.2 Материал исследования
2.3 Методы исследования
2.3.1 Получение осветленных гомогенатов
2.3.2 Фракционирование протеасом
2.3.3 Определение активности протеасом
2.3.4 Электрофорез белков
2.3.5 Вестерн-блоттинг
2.3.6 Определение активности кальпаинов
2.3.7 Определение экспрессии локомоторных белков
2.3.8 Ингибиторный анализ
2.3.9 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.1 Протеасомы и кальпаины в малигнизированном и гиперплазированном эндометрии
3.1.1 Активность протеасом и их пулов в малигнизированном и гиперплазированном эндометрии
3.1.2 Экспрессия субъединиц протеасом в малигнизированном и гиперплазированном эндометрии
3.1.3 Связь метаболического синдрома с состоянием протеасомной и кальпаиновой систем при гиперплазии и раке эндометрия
3.1.4 Активность кальпаинов в малигнизированном и гиперплазированном эндометрии
3.2 Изучение экспрессии локомоторных белков и их регуляции внутриклеточными протеиназами в малигнизированном и гиперплазированном эндометрии
3.3 Изучение противоопухолевой активности ингибиторов протеасом и кальпаинов in vitro
3.4 Прогностическая значимость показателей протеасомной системы в тканях рака эндометрия
3.5 Определение онкологического риска у больных с гиперпластическими процессами эндометрия на основании показателей внутриклеточного
протеолиза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АТФ — аденозинтрифосфотат
ГЭ — гиперпластические процессы эндометрия
ММП - матриксные металлопротеиназы
РЭ — рак эндометрия
ЭДТА — этилендиамидтетраацетат
ЭМП - эпителиально-мезенхимальный переход
ALLN - N-ацетил-лейцин-лейцин-норлейциналь, ингибитор кальпаиновой активности
АРС - Adenomatous polyposis coli, онкосупрессор
Arp 3 — actin-related protein 3, компонент актин-ветвящего комплекса Arp 2/3
CDK - cyclin-dependent kinase, циклинзависимые киназы
EGFR — epidermal growth factor receptor, рецептор эпидермального фактора
роста
ER - estrogen receptor, рецептор эстрогена
GSK3 - glycogen synthase kinase 3, киназа гликогенсинтетазы
HER-2/neu — human epidermal growth factor receptor 2, рецептор
эпидермального фактора роста
HIF-l - hypoxia-inducible factor 1, фактор, индуцируемый гипоксией, -1 IGF - insulin-like growth factor, инсулиноподобный фактор роста IGF-IR - insulin-like growth factor receptor I, рецептор инсулиноподобного фактора роста
IkB - inhibitor of kappa В, ингибитор NF-кВ KRAS - Kirsten rat sarcoma, протоонкоген
LMP - low molecular mass polypeptide, иммунные субъединицы протеасом Mdm2 - mouse double minute 2, убиквитин-лигаза
NF-кВ - nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells, ядерный фактор кВ

при РЭ были описаны нами выше [46, 126]. Также показано, что кальпаины разрушают и циклин Е, играющий ключевую роль в переходе клетки из G1 в S-фазу [28]. Интересно, что при РЭ наблюдается повышенная экспрессия циклина Е по сравнению с нормальным и гиперплазированным эндометрием, причём этот показатель выше в низкодифференцированных опухолях, в связи с чем предполагается непосредственное участие циклина Е в развитии и прогрессии РЭ [101]. Необходимо отметить, что существует много точек приложения для протеолитической регуляции кальпаинами клеточного цикла, в связи с чем кальпаины могут быть как позитивными, так и негативными его регуляторами. К значимым субстратам можно отнести белок pi 07 (регуляция совместно с протеасомами), член семейства белков ретинобластомы, который подавляет рост опухолевых клеток, продукт протоонкогена c-Mos, циклин D1, CDK-ингибитор р19 [47, 55, 98, 169]. Предполагается, что влияя на
активность кальпаинов, можно воздействовать на прохождение клеткой клеточного цикла, способствуя гибели опухолевых клеток, в том числе и при РЭ [119].
Другим значимым для опухолевого роста, в том числе и в эндометрии, процессом, в регуляции которого принимают участие кальпаины, является апоптоз. Известно, что кальпаины активно взаимодействуют с каспазами, а кроме того, многие эффекторы и регуляторы программируемой клеточной гибели являются субстратами кальпаинов. Осуществляемый ими лимитированный протеолиз про- и антиапоптотических белков может активировать или, напротив, инактивировать такие белки, как р53, Bcl-2, Вс1-xl, Bid, Вах, каспазы-3, -7, -8, -9 и -12, NF-kB [207].
Так же как и протеасомы, кальпаины принимают участие в регуляции ангиогенеза. Показано, что VEGF, ключевой ангиогенный цитокин, повышает экспрессию и активность кальпаинов, а их ингибирование подавляет образование новых кровеносных сосудов, что указывает на опосредующую