Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы

• Автор: Калитин, Николай Николаевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Множественная миелома как злокачественное заболевание системы крови

1.1.1 .Общая характеристика и основы патогенеза данной нозологии

1.1.2. Структурно-функциональные особенности главных антигенов суперсемейства СБ, участвующих в В-клеточной дифференцировке

1.1.3. Антигены СБ45 и СБ56 - связь с неопластической трансформацией

1.2. Семейство факторов роста эндотелия сосудов и их рецепторов УЕСБ: фундаментальные и прикладные аспекты

1.2.1. Структурно-функциональные характеристики важнейших факторов роста УЕСРэ

1.2.1.2. Факторы роста эндотелия сосудов УЕСР-С и niGF-D

1.2.2. Сигнальные каскады, запускаемые важнейшими факторами роста семейства УЕСР в миеломных клетках

1.2.2.1. УЕСРШ -связанные сигнальные процессы

1.2.2.2. УЕСРЯ2-связанные сигнальные процессы
1.2.2.3. УЕСРЯЗ-связанные сигнальные процессы
1.2.3. Антиангиогенная терапия
1.3. Суперсемейство ядерных рецепторов ретиноевой кислоты: функциональный контроль экспрессии в норме и при патологии
1.3.1. Рецепторы ЯАЯэ и ЯХЯэ: принципы регуляции экспрессии таргетных генов
1.3.2. Неканонические модели ЯАЯ-опосредованного контроля транскрипции генов
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клеточные культуры множественной миеломы (ММ) человека
2.2. Опыты на клеточных культурах ММ человека
Анализ пролиферативной активности клеточных культур ММ
Оценка влияния а!ЯА на изменение экспрессии генов семейства УЕСР
Оценка цитотоксического эффекта колориметрическим методом (МТТ-тест)
2.3. Анализ экспрессии мРНК генов
Выделение РНК из эукариотических клеток ММ
Реакция обратной транскрипции
Полимеразная цепная реакция
2.4. Исследование клинического материала больных ММ
Получение мононуклеарной фракции
Проточная цитофлуориметрия
Статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Роль изменений экспрессии генов факторов роста семейства УЕСЯ и их рецепторов у больных множественной миеломой
3.1.1. Экспрессия мРНК генов семейства УЕСР у больных множественной миеломой
3.1.2. Сопоставление экспрессии мРНК генов семейства УЕОЯ с некоторьми цитологическими характеристиками аспиратов костного мозга больных множественной миеломой
3.1.3. Определение экспресии белка рецептора УЕОРЯЗ у больных множественной миеломой с помощью проточной цитометрии
3.1.4. Исследование участия рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа в регуляции экспрессии генов УЕйРЯЗ-ассоциированной сигнальной системы
3.2. Изменения экспрессии генов факторов роста семейства УЕСЯ и их рецепторов в клеточных культурах множественной миеломы человека
3.2.1. Характеристика клеточных культур по экспрессии дифференцировочных маркеров
3.2.2. Исследование пролиферативной активности клеток культур ММ человека
3.2.2.1. Определение скорости роста линий ЯРМІ 1640, ЯРМІ 8226 и ЇМ
3.2.2.2.Определение чувствительности клеточных культур ЯРМІ 1640, ЯРМІ 8226 и ІМ 9 к протеасомному ингибитору бортезомиб (Уеісасіе)
3.2.3. Роль АТЯА на изменение экспрессии генов семейства УЕСЛ в клеточных культурах ММ человека
4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Корреляция цитологических показателей и экспрессии компонентов УЕОР-ассоциированных сигнальных систем у больных множественной миеломой
4.2. Экспрессия мРНК генов УЕвРЯЗ-ассоциированной сигнальной системы, гена ЯАЯа и характеристика клеточных культур ММ человека
4.3. Иммунофенотипический профиль плазматических клеток как гипотетический маркер: популяционная гетерогенность и гетерогенность свойств
ВЫВОДЫ
список использованной литературы

Список сокращений
ао - аминокислотный остаток
МГНГ - моноклональная гаммапатия неясного генеза
ММ - множественная миелома человека
МП - мелфалан/преднизолон
ОЛПК - общая лимфоидная прогениторная клетка
Akt (serine/threonine protein kinase В (PKB)/Akt) - протеинкиназа В
АР-1 (Activator Protein 1) - транскрипционный комплекс факторов c-Fos и c-Jun
atRA (all-trans retinoic acid) - транс-ретиноевая кислота
BCR (В-cell receptor) - В-клеточный рецептор
CD (cluster of differentiation) - кластер дифференцировки
CRABPII (Cellular Retinoic Acid Binding Protein II) - цитоплазматический белок,
связывающий рецепторы ретиноевой кислоты
ECs (Endothelial Cells) - эндотелиальные клетки сосудов
FCS (Fetal Cow Serum) - эмбриональная телячья сыворотка
FGF (Fibroblast Growth Factor) - фактор роста фибробластов
FGFR (Fibroblast Growth Factor Receptor) - рецептор фактора роста фибробластов
Flk-l/KDR (Fetal Liver Kinase 1- мышиный гомолог/Kinase insert Domain containing
Receptor-человеческий гомолог VEGFR-2)
GRB2 (Growth-factor-Receptor-Bound protein 2) - адаптерный белок GRB2
HDAC7 (Histone Deacetylase 7) - гистоновая деацетилаза 7 типа
HIF-la (hypoxia inducible factor la) - гипоксия-индуцируемый фактор la
Ig (Immunoglobulin) — иммуноглобулиновая молекула
IGF-1 (Insulin-like Growth Factor 1) - инсулиноподобный фактор роста
IL-6 (Interleukin 6) - интерлейкин
JNK(c-Jun N-terminal Kinase) - c-Jun N-концевая киназа
МАРК (Mitogen-Activated Protein Kinase) - митоген-активируемая протеинкиназа MMPs (Matrix Metalloproteinases ) - матриксные металлопротеиназы NAD (Nicotinamide Adenine Dinucleotide) - никотинадениндинуклеотид NCAM (neural cell adhesion molecule ) - молекула адгезии нервных клеток NcoA (Nuclear coactivator Receptor) - ядерный коактиватор NcoR (Nuclear corepressor Receptor) - ядерный корепрессор
NFkB (Nuclear Factor- кВ) - транскрипционный фактор энхансера к легкой полипептидной цепи в В-клетках

злокачественным заболеванием из группы гемобластозов, для которого неоангиогенез был впервые определен [329]. В дальнейшем рядом авторов была подтверждена решающая роль новообразования сосудов в патогенезе ММ [264,291].
Так, основываясь на определении плотности прорастания микрососудами паренхимы костного мозга (MVD - microvessel density), Vacca, A. et а! определили прямую корреляцию между уровнем MVD, прогрессией множественной миеломы и плохим прогнозом [330]. Между тем, Kumar, S. et al, проанализировав изменения экспрессии важнейших ангиогенных цитокинов и их рецепторов, а также MVD у больных с MGUS, тлеющей, новодиагностированной и рефрактерной миеломой, пришли к гипотезе о возможной хронологической маркерности показателя MVD [168].
Первым антиангиогенным препаратом, показавшим эффективность у больных множественной миеломой, оказался иммуномодулятор талидомид [12,64]. Он значительно снижал в монорежиме костномозговой ангиогенез и секрецию VEGF-A у пациентов с ММ в активной фазе, давая частичный ответ более 30%, а у 14% больных демонстрируя полную ремиссию с двухлетней выживаемостью на уровне 48% в группе, включавшей 169 больных с рефрактерной/рецидивирующей ММ [19]. В третьей фазе исследований при использовании комбинации талидомида с дексаметазоном величина достоверно значимого ответа на данную схему терапии увеличилась до 63% [262,263].
Углубление представлений о роли взаимодействия миеломных клеток со стромальным микроокружением костного мозга позволило идентифицировать дополнительные антимиеломные активности талидомида [220]. Помимо ангиогенной активности, талидомид усиливает Т- и NK-клеточный иммунный ответ, индуцирует каспаза-8-зависимый апоптоз, снижает экспрессию 1L-6 стромальными клетками и увеличивает чувствительность миеломных клеток к действию других цитостатиков, применяемых в комбинации с талидомидом [221,67].
Аналогом талидомида является препарат леналидомид. Сравнительный протеомный анализ показал, что в ECs у больных ММ, леченых леналидомидом, изменяются уровни экспрессии ключевых генов ангиогенеза, контролирующих локомоторный фенотип, инвазивность, морфологию и энергетический метаболизм клеток. Его антиангиогенная активность, в частности, выражается в способности ингибировать взаимодействия между кадгерином 5, (3-катенином, CD31, которые крайне важны для развития ангиогенеза [69]. Более того, он ингибировал PI3K сигнальный путь и экспрессию HIF-la, а также продемонстрировал антагонизм по отношению к TNF-a, способность модулировать иммунный ответ, индуцировать апоптоз опухолевых клеток и снижать адгезию миеломных клеток к внеклеточному матриксу [194,49,177]