КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ПРИ НАСЛЕДСТВЕННОМ И СПОРАДИЧЕСКОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

• Автор: Сытенкова, Кристина Вячеславовна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 153 с. : 56 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Эпидемиологические факторы РМЖ
1.2. Наследственная предрасположенность к раку молочной железы
1.3. Ген ВЯСА1
1.4. Г ен ВЯСА2
1.5. Ген ТР53
1.6. Особенности ВЯСА- и ЗЕЗЗ-ассоциировапного рака молочной железы
1.7. Полиморфные варианты в генах ВЯСА! и ВЯСА2
1.8. Полиморфные варианты в гене ТР53
1.9. Перспективы лекарственной терапии наследственного рака молочной железы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Оценка клинического материала
2.2. Молекулярная диагностика
2.3. Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ
ЖЕЛЕЗЫ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВЯСА- И 7Е53-ГЕНОТИПА
3.1. Анамнестические особенности РМЖ в зависимости от ВЯСА- и 7У53-генотипа
3.2. Клинические особенности РМЖ в зависимости от ВЯСА- и 7’Р53-генотипа
3.3. Диагностические особенности РМЖ в зависимости от генотипа
3.4. Морфологические особенности РМЖ с учетом ВЯСА- и ТУЗ-статуса
3.5. Анализ частоты ЗНО в семьях в зависимости от ВЯСА- и ГЕЗЗ-генотипа
3.6. Оценка частоты генотипических ВЯСА 112 и ТР53 вариантов у больных НРМЖ
3.7. Варианты лечения больных в группах НРМЖ и СРМЖ
3.8. Отдаленные результаты
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АКТ внутриклеточный фермент, семейство протеинкиназ В
ГТ гормонотерапия
Днк дезоксирибонуклеиновая кислота
зно злокачественные новообразования
лт лучевая терапия
мж молочная железа
НРМЖ наследственный рак молочной железы
пмзо первично-множественные злокачественные опухоли
РМЖ рак молочной железы
РП рецепторы прогестерона
РТК рак толстой кишки
РЭ рецепторы эстрогена
РЯ рак яичника
ПЦР полимеразная цепная реакция
ССРМЖЯ синдром наследственного рака молочной железы
СРМЖ спорадический рак молочной железы
США Соединенные Штаты Америки
XT химиотерапия
Циклин D1 входит в группу цикпинов G1
Циклин Е входит в группу циклинов G1
Циклин р27 циклин-зависимый ингибитор киназы
ЭКО экстракорпоральное оплодотворение
ATM ataxia telangiectasia mutated
BLM Bloom syndrome, RecQ helicase-like
BRCA 1 breast cancer antigen
BRCA2 breast cancer antigen
BRIP1 BRCA1 interacting protein С-terminal helicase
CDH1 cadherin
СНЕК2 checkpoint kinase

EGRF epidermal growth factor receptor
HBOC hereditary breast-ovarian cancer
ING4 inhibitor of growth family, member
MDM2 mouse double minute
MLH1 mutL homolog
MSH2 mutS homolog
MSH6 mutS homolog
MYC v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog NBS1 nibrin (Nijmegen Breakage Syndrome 1)
PARB poly(ADP-ribose) polymerase
p53 tumor suppressor protein 53 that in humans is encoded by the
TP53 gene
PTEN phosphatase and tensin homolog
SNP single nucleotide polymorphism
STK11 serine/threonine kinase
TP5 3 tumor protein
wtBRCA/TP53 wild type Breast Cancer Antigen (ген BRCA дикого типа) and wild type tumor protein 53 (ген TP53 дикого типа)

РНК-азной активности), вновь повторяли центрифугирование при комнатной температуре в течение 2 минут с дальнейшим переносом прозрачного верхнего водного слоя в новую пробирку. Добавляли к смеси равный объем хлороформа для полного удаления фенола и вновь повторяли 2-х минутное центрифугирование при комнатной температуре и перенос верхнего водного слоя в новую пробирку. К пробе добавляли 125 мкл 8 М ацетата аммония из расчета на 500 мкл смеси (конечная концентрация - 2М) и осаждали ДНК 100% этанолом - в соотношении 1:2. Для полного выпадения ДНК пробы охлаждали в течение 30 минут при - 70° С. Затем их размораживали и центрифугировали (12000 об/мин) в течение 10 минут. В дальнейшем дважды промывали полученный осадок 80% этанолом, удаляли спирт и растворяли в деионизированной воде (200 мкл). В самом конце измеряли концентрацию ДНК на флуориметре.
Полимеразная цепная реакции Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) использовали для осуществления амплификации фрагментов геномной ДНК. Данная методика проводилась на программируемом термоциклере МС2 фирмы «ДНК-технология» (Россия) в 25 мкл объеме реакционной смеси, в состав которой входили: 30 - 50 нг геномной ДНК, 30 пМ каждого оригинального олигопраймера, по 2 мМ каждого нуклеозидтрифосфата, 0,5 единицы активности ДНК-полимеразы («СибЭнзим», Россия), буфер для ПЦР (500 мМ трис, 500 мМ КС1, pH 8,74), 20 - 30 мкл вазелинового масла. При проведении ПЦР использовали набор оригинальных олигонуклеотидных праймеров, синтезированных в НПО «SYNTOL» (Россия), обеспечивающих амплификацию экзонов с примыкающими частями интронов (50-100 п.н.). Для охвата всех экзонов гена BRCA1 (таблица 3) было задействовано 39 пар праймеров и 17 пар праймеров для исследования определенных экзонов гена BRCA2 (таблица 4). Учитывая тот факт, что 11 экзон гена BRCA1, а также 10 и 11 экзоны гена BRCA2 большие по протяженности, их разбили на 18 и на 5 и 15 коротких перекрывающихся участков, соответственно.