Клинические,морфологические и генетические предикторы резистентности к стероидной терапии хронического гломерулонефрита у детей

• Автор: Резников, Алексей Юрьевич
• Шифр специальности: 14.01.08
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : 8 ил.

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

ГЛАВА

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

ГЛАВА

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА
ОБЩАЯ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕТЕЙ СО СТЕРОИДРЕЗИСТЕНТНЫМ НЕФРОТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ
Клинико-лабораторная характеристика детей с непролиферативными формами хронического гломерулонефрита: фокально-сегментарный гломерулосклероз и болезнь минимальных изменений
Клинико-лабораторная характеристика детей с пролиферативными формами хронического гломерулонефрита: мезангиопролиферативный ( в том числе IgA- и IgM-нефропатии) и мембранопролиферативный гломерулонефрити
ГЛАВА
АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ МУТАЦИЙ И ПОЛИМОРФНЫХ АЛЛЕЛЕЙ ГЕНА ПОДОЦИНА NPHS2 СО СТЕРОИДРЕЗИСТЕНТЫМ НЕФРОТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ
ГЛАВА
АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ER22/23EK,
Tthl 1II, N363S, Bell ГЕНА ГЛЮКОКОРТИКОИДНОГО РЕЦЕПТОРА (NR3C1) У ДЕТЕЙ СО СТЕРОИДРЕЗИСТЕНТНЫМ НЕФРОТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ
ГЛАВА
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - артериальная гипертония
БМИ - болезнь минимальных изменений
БМ- базальная мембрана
ГКС - глюкокортикостероиды
ГР - глюкокортикоидный рецептор
ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота
ИМС - изолированный мочевой синдром
МезПГН - мезангиопролиферативный гломерулонефрит
МПГН - мембранопролиферативный гломерулонефрит
МП - метилпреднизолон
МФ - микофенолаты НС- нефротический синдром
НС - нефротический синдром
РА - ревматоидный артрит
СКФ - скорость клубочковой фильтрации
СМАД - суточное мониторирование артериального давления
СРНС - стероидрезистентный нефротический синдром
ФСГС - фокально-сегментарный гломерулосклероз
ХБП- хроническая болезнь почек
ХПН - хроническая почечная недостаточность
ЦсА - циклоспорин А
ISKDC - International Study of Kidney Disease in Children K/DOQI- Kidney Disease Outcome, Quality Initiative

ВВЕДЕНИЕ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Нефротический синдром (НС), характеризуется массивной протеинурией и гипоальбуминемией и выраженными отёками, является наиболее распространенным патологическим состоянием поражающим клубочковый аппарат почки у детей [130]. Гистологическими основами идиопатического НС, наблюдаемого в детском возрасте, являются болезнь минимальных изменений (БМИ), мезангиопролиферативный гломерулонефрит (МезПГН) и фокально-сегментарный гломерулоклероз (ФСГС) [69, 89]. Доля других морфологических форм, таких как мембранопролиферативный и мембранозный гломерулонефиты значительно скромнее [47, 69]. В последние годы отмечается тенденция к росту стероидрезистентных форм НС у детей. Так по данным международного исследования заболеваний почек наиболее часто встречаемой морфологической формой НС у детей был нефрит с минимальными изменениями. ФСГС и другие морфологические формы наблюдались менее чем в 10% случаев. Более того, 93-98% детей с БМИ и 17-30% с ФСГС были чувствительны к стероидной терапии [90; 192]. Стероидрезистентность наблюдалась приблизительно у 20% детей с НС. На основе отчета ІБКБС, применение кортикостероидов было рекомендовано в качестве стандартной терапии НС у детей [90].
Однако данные последних проспективных исследований демонстрируют неуклонный рост стероидрезистентного НС (СРНС), обусловленного увеличением встречаемости ФСГС, как морфологической основы НС у детей [60, 68, 187].
Глюкокортикостероиды как основополагающие препараты при лечении НС при введении в организм взаимодействуют с глюкокортикоидными рецепторами , оказывая противовоспалительное действие [26]. Однако, для них характерны такие побочные эффекты, как нарушение обмена углеводов и

Таблица
Праймеры и рестриктазы гена NR3C1
Полиморфизм Последовательности праймеров Рестри ктаза Величины фрагментов после расщепления
rsl0052957 (Tthllll) atttattgcgcatctgctgtctga Tthllll 203 и 93 н.п.
atgtatttgttgggtgcctgctatg
rs41423247 (Bell) ggatgaggttacggggtagagaaat Bell 282 и 100 н.п.
gctaaagcaatgcagtgaacagtg
rs6195 rs57667111, (N363S) tttttaatgtcattccaccaactcccg Sse9I 56 и 40 н.п.
T cagagtccccagagaagtcaagttgt
rs6189 и rs6190 (ER22/23EK) gattcggagttaactaaaaggttcat Mnll 188 и 44 н.п
Ttagggttttatagaagtccatcacat
Мутации гена подоцина NPHS2 исследовали методом прямого автоматического секвенирования. ДНК больных была выделена из лейкоцитов крови с использованием набора «ДНК-сорб-Б» фирмы Интерлабсервис (Россия) по инструкции, прилагаемой к набору.
Амплификацию фрагментов ДНК, представляющих собой экзоны гена NPHS2 с фланкирующими их последовательностями, проводили на термоциклере Dyad фирмы Bio-Rad (США) с использованием программы для первого экзона: 98*С -5’,85*С-5’, 60*С-30”,72*С-60” далее 35 циклов по программе 98*С-30”, 60*С-30”, 72*С-60”. Для амплификации первого экзона использовался фермент “ThermalAce DNA Polymerase” фирмы Invitrogen (США).
Остальные экзоны амплифицировали с использованием фермента “HS-DNA Polymerase” фирмы Евроген (Россия) по программе: 95*С-3’,95*С-30”,60*С-30”,72*С-60”, далее 35 циклов по программе 95*С-30”,60*С-30”, 72*С-60”
При этом использовали праймеры(табл.4).