Медико-биологические аспекты конструирования биокератопротезного комплекса с использованием культивированных фибробластов

• Автор: Шипунова, Анна Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : 32 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К РЕШЕНИЮ ПРОБЛЕМ УСПЕШНОГО КЕРАТОПРОТЕЗИРОВАНИЯ ОСЛОЖНЕННЫХ БЕЛЬМ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1Л. Медико-биологические аспекты эволюции конструирования кератопротезов
1.2. Современные представления о роли макрофагально-фибропластического взаимодействия для формирования тканевой реакции на имплантат в роговице реципиента
1.3. Клиническое применение культивированных фибробластов кожи для индукции процессов регенерации в восстановительной медицине и офтальмологии
1.4. Кросслинкинг роговичного коллагена как важный этап подготовки конструкции кератопротеза к имплантации
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал экспериментальных исследований
2.2. Техника моделирования in vitro кератопротезных конструкции
2.2.1. Подготовка кератопротезных конструкций
2.2.2. Подготовка фибробластов кожи
2.2.3. Конструирование биокератопротезной конструкции
2.3. Техника подготовки и имплантации кератопротезных конструкций в экспериментах
на кроликах
2.4. Клинические и лабораторные методы исследований.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЛАБОРАТОРНЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ КОНСТРУИРОВАНИЯ БИОКЕРАТОПРОТЕЗНОГО КОМПЛЕКСА ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ИМПЛАНТИАЦИИ БИОКЕРАТОПРОТЕЗНОГО КОМПЛЕКСА
4.1.. Клинические результаты имплантации кератопротезных конструкций
4.2. Морфологические результаты ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БКПК Биокератопротезный комплекс
ВКМ Внеклеточный матрикс
КПК Кератопротезная конструкция
МФБ Миофибробласты
ОПК Опорная пластинка кератопротеза
СЭМ Сканирующая электронная микроскопия
ФБ Фибробласты
ЭТС Эмбриональная телячья сыворотка
DMEM Среда Игла в модификации Дульбекко
EGF Эпидермальный фактор роста
EGFP Усиленный зеленый флуоресцирующий белок
bFGF Основной фактор роста фибробластов
IgG Иммуноглобулин G
IL-a Интерлейкин
KGF Фактор роста кератиноцитов
PBS Фосфатный буферный раствор
РНЕМА Полигидроксиэтилметакрилат
РММА Полиметилмстакрилат
PTFE Политетрафторэтилен
a-SMA Гладкомышечный a-актин
TGF-a Трансформирующий фактор роста-а
TGF-(3 Трансформирующий фактор роста-р
TNF-a Туморонекротический фактор-а
UVA Ультрафиолет
после работ I. Yannas (1980) по созданию «искусственной кожи» на основе матрикса из коллагена I типа и гликозаминогликанов. В последующие годы ученые пытались восстанавливать с помощью аутогенного или аллогенного пластического материала многие ткани организма (Wendt J.R. et al., 2004; Levine L.A. et al., 2007).
Использование культуральных подложек открыло возможность конструирования различных вариантов биологических покрытий для лечения ран, восстановления уротелия, лечения трофических язв и др. (Терских В.В. и др., 2003; Роговая О.С. и др., 2004; Pathiraja A., 2003; Hasegawa Т. et al., 2005; Dorin R. et al., 2008). В качестве биоматрикса в живых тканевых эквивалентах используются различные материалы на основе свиной дермы (Matouskova E. et al., 2006), амниотической оболочки (Ahn J. et al., 2007), синтетических биодеградирующих и небиодеградирующих материалов (Prichard H. et al., 2006; Altman A. et al., 2008), грибного мицелия (Su C. et al., 2005), подслизистой оболочки мочевого пузыря (Lu S. et al., 2005), фибриновой пленки (Pellegrini G.et al., 1999). На основе коллагенового геля, являющегося структурированной коллоидной системой, были разработаны так называемые «дермальные эквиваленты» - раневые покрытия по структуре подобные дерме, эпидермису или коже (Bell E. et al., 1979, 1981; Grinnel F. et al., 1982, 1986; Malakhov S. et al., 1994; Auger F. et al. 1998; Meana A. et al., 1998). В своих работах E. Bell (1983) показал, что добавление аллогенных культивированных ФБ в трехмерный коллагеновый гель приводит к созданию in vitro “живого эквивалента дермы”, являющегося наиболее естественным микроокружением для мезенхимальных стромальных клеток в культуре. Внесение ФБ в коллагеновый гель способствует его контракции и созданию структуры, схожей с соединительной тканью (Wasserman D. et al., 1988; Yamaguchi T. et al.,1996; Yannas I. et al., 1998). Коллагеновый гель является доступным биологическим субстратом, не содержащим большого количества примесей (Asselineau D. et al., 1986; Mourra N. et al., 1998). Гель получают из коллагена I типа, выделяемого из хвостов лабораторных крыс. На основе коллагенового геля были созданы органные