Особенности апоптоза и его регуляция в эндометрии женщин с трубно-перитонеальным бесплодием при различных исходах экстракорпорального оплодотворения

• Автор: Бойцова, Алиса Витальевна
• Шифр специальности: 14.01.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Иваново
• Количество страниц: 121 с. : 3 ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о трубно-перитонеальном бесплодии и факторах, влияющих на эффективность его лечения методом экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона в полость матки
1.2. Эндометрий, как фактор, определяющий успех имплантации в программе ЭКО при лечении бесплодия, обусловленного трубно-перитонеальным фактором
1.3. Значение апоптоза в регуляции имплантационного потенциала у женщин в программе ЭКО при лечении бесплодия, обусловленного трубно-перитонеальным фактором
ГЛАВА

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Организация работы и характеристика объекта исследования

2.2. Методика программы экстракорпорального оплодотворения

2.3. Методы исследования
2.3.1. Иммунологические методы исследования
2.3.2. Морфологические методы исследования
2.3.3. Статистические методы исследования
ГЛАВА
КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДОВАННЫХ ЖЕНЩИН
3.1. Сравнительная клиническая характеристика женщин с трубно-перитонеальным
бесплодием
3.2. Сравнительная клиническая характеристика женщин с трубно-перитонеальным
бесплодием в зависимости от исхода программы ЭКО
ГЛАВА
ОСОБЕННОСТИ РЕГУЛЯЦИИ FAS-ЗАВИСИМОГО АПОПТОЗА В ЭНДОМЕТРИИ ЖЕНЩИН С ТРУБНО-ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМ БЕСПЛОДИЕМ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОГРАММЕ ЭКО
4.1. Характеристика экспрессии Fas и FasL молекул эндометриальными лимфоцитами и макрофагами у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием
4.2. Особенности апоптоза эндометриальных стромальных клеток у женщин с трубноперитонеальным бесплодием
4.3. Особенности экспрессии Fas и FasL молекул эндометриальными лимфоцитами и
макрофагами женщин с трубно-перитонеальным бесплодием с различным исходом программы ЭКО
ГЛАВА
ОСОБЕННОСТИ ГЕННОЙ РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА В ЭНДОМЕТРИИ ПАЦИЕНТОК С ТРУБНО-ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМ БЕСПЛОДИЕМ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОГРАММЕ ЭКО
5.1. Характеристика экспрессии мРНК факторов, активирующих и ингибирующих апоптоз,
в эндометрии пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, участвующих в программе ЭКО
5.2. Характеристика экспрессии мРНК факторов, активирующих и ингибирующих апоптоз, в эндометрии пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием в зависимости от исхода ЭКО
ГЛАВА
РОЛЬ IFNy В РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА В ЭНДОМЕТРИИ ПАЦИЕНТОК С ТРУБНОПЕРИТОНЕАЛЬНЫМ БЕСПЛОДИЕМ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОГРАММЕ ЭКО
6.1. Особенности экспрессии мРНК IFNy в эндометрии пациенток с трубноперитонеальным бесплодием, участвующих в программе ЭКО
6.2. Влияние in vitro IFNy на апоптоз и его регуляцию в эндометрии женщин с трубноперитонеальным бесплодием

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования
В последние годы при лечении различных видов бесплодия широкое распространение получили вспомогательные репродуктивные технологии, в том числе метод экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [34, 35]. Одной из наиболее частых причин обращения супружеских пар к этому методу является трубно-перитонеальный фактор бесплодия, поскольку при данной нозологической форме проведение ЭКО, в большинстве случаев, является единственным эффективным методом лечения [11, 29, 227]. Однако, несмотря на видимый прогресс, достигнутый при разработке протоколов овариальной стимуляции, в целом, результативность ЭКО остается недостаточно высокой и составляет в среднем 35% [26, 102]. Повышение эффективности существующих методов лечения бесплодия невозможно без изучения механизмов регуляции имплантации - одного из наиболее сложных этапов развития взаимоотношений между эмбрионом и материнским организмом [56].
Многие исследователи считают, что неуспех имплантации эмбриона при проведении ЭКО связан с нарушениями на уровне эндометрия [73, 74, 81]. Известно, что структурная и функциональная перестройка эндометрия в течение менструального цикла является необходимым условием для успешной имплантации и прогрессирования беременности [71, 209]. В подготовке эндометрия к имплантации выявлена важная роль целого ряда факторов. К числу этих факторов относятся различные цитокины и факторы роста, интегрины и адгезионные молекулы, протеолитические ферменты [73, 95, 207, 239]. Показано, что в основе структурной перестройки эндометрия в течение цикла лежит изменения апоптоза эндометриальных клеток. В пролиферативную фазу цикла в эндометрии отмечаются лишь единичные апоптотические клетки, тогда как в секреторную фазу цикла, и непосредственно перед менструацией, апоптоз в ткани эндометрия резко усиливается [74, 209]. Установлено, что важную роль в регуляции апоптоза в эндометрии играет соотношение синтезируемых в ткани

Россия) и каспазы-3 производства ООО «Фрактал Био», (Санкт-Петербург, Россия). Для количественного определения кДНК в исследуемых образцах строили калибровочную кривую для (32-микроглобулина и специфических генов с использованием серии десятикратных разведений образцов контрольной кДНК. В каждом образце определяли количество копий с использованием стандартной кривой, построенной с использованием программного обеспечения iCycler iQ. В каждом индивидуальном образце для получения нормализованного значения, количество копий специфического гена делили на количество копий гена домашнего хозяйства. Результаты были представлены как нормализованное количество копий в образце х 101 на мкл для PTEN, количество копий в образце х 102 на мкл для каспазы-3, количество копий в образце х 104 на мкл для XIAP и HSP27 [131].
Культивирование in vitro эндометриальных биоптатов с IFNy
Для определения влияния чистого препарата IFNy на апоптоз ткани эндометрия проводили культивирование эндометриальных эксплантов размером 0,5-0,7 мм в диаметре, полученных от женщин с трубно-перитонеальным бесплодием, в среде RPMI 1640, содержащей IFNy в концентрациях 10 и 50 пг/мл в течение 24 часов при 37°С и 5% СОг. Показатели эндометриальных эксплантов, инкубировавшихся в тех же условиях только в среде RPMI 1640, использовали в качестве контроля. После окончания срока культивирования ткань эндометрия отмывали, и либо фиксировали для последующего выделения РНК, или подвергали ферментативной обработке для получения популяции стромальных клеток и проведения теста с AnnexinV+.
2.3.2. Морфологические методы исследования
Производилась обзорное гистологическое исследование эндометрия. Биоптаты эндометрия фиксировались в 10%-ном нейтральном формалине в течение 72 часов. После стандартной парафиновой проводки готовились срезы