Разработка иммуноферментных тест-систем для серологического мониторинга кишечных и респираторных болезней свиней

• Автор: Оганесян, Андрей Серожович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 166 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АБТС - 2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота
ВБА - вирус болезни Ауески
ГС - грипп свиней
ИФА - иммуноферментный анализ
КББ - карбонатно-бикарбонатный буферный раствор
КРБС - комплекс респираторных болезней свиней
КЧС - классическая чума свиней
н-ИФА - непрямой вариант иммуноферментного анализа ОП - оптическая плотность
ОС - относительная специфичность тест-системы
04 - относительная чувствительность тест-системы
ПВС - парвовирус свиней
ПНП - позитивно-негативный порог реакции
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РВИС - ротавирусная инфекция свиней
РВС - ротавирус свиней
РКВС — респираторный коронавирус свиней
РРСС - репродуктивно-респираторный синдром свиней
СПМИ - синдром послеотьёмного мультисистемного истощения
ТБР - трис-буферный раствор (ТБР) рН-7,4-7
ТГС - трансмиссивный гастроэнтерит свиней
Тритон Х-100 - Triton Х-100, [Octoxinol-9, Ci4H220(C2H40)n; cn = 9-10] ЦВИС - цирковирусная инфекция свиней ЦВС-2 - цирковирус свиней второго типа
ЦФО РФ - Центральный Федеральный округ Российской Федерации Ар - предполагаемая превалентность определенная тестом Ig А - иммуноглобулины А Ig G - иммуноглобулины G
MARK - 145 культура клеток почек зеленой мартышки МН (M.hyo) - Mycoplasma hyopneumoniae
NC - оптическая плотность отрицательной контрольной сыворотки NC - отрицательная контрольная проба
NP-40 - Nonidet Р-40, [Octylphcnoxypolyethoxyethanol] - Ыонидет Р-40 PC - оптическая плотность положительной контрольной сыворотки PC - положительная контрольная проба
RSK— культура клеток кожи кролика Oryctolagus cuniculus L.
SDS - додецилсульфат натрия
Se - (sensitivity, англ) - чувствительность тест-системы Sp - (specifity, англ) — специфичность тест-системы Тр - истинная превалентность определённая тестом

ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.:
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Инфекции смешанной этиологии у свиней
2.2. Эпизоотическая ситуация по КРБС в странах
2.3. Эпизоотическая ситуация по КРБС в Российской Федерации
2.4. Энзоотическая пневмония свиней
2.5. Репродуктивный и респираторный синдром свиней
2.6. Респираторная коронавирусная инфекция свиней
2.7. Цирковирусная инфекция свиней
2.8. Болезнь Ауески
2.9. Ротавирусная инфекция свиней
2.10. Метод иммуноферментного анализа
в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний
2.11. Эпизоотологические исследования
2.11.1. Методы исследований в популяции
2.11.2. Определение объёма выборки
2.11.3. Принцип отбора проб для расчета превалентности
2.12. Методы поиска этиологических факторов болезни
2.13. Заключение по обзору литературы
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы и методы
3.1.1. Материалы
3.1.2. Методы
3.1.2.1. Методы анализа данных
3.1.2.2. Формирование выборки
3.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.3.1. Разработка тест-систем на основе ИФА
3.3.1.1 Разработка непрямого варианта ИФА для выявления антител
к ротавирусу свиней в сыворотках крови методом одного разведения
3.3.1.1.1. Применение разработанного варианта ИФА

3.3.1.2. Разработка непрямого варианта ИФА для определения
антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней
3.3.1.2.1. Применение разработанного варианта ИФА
3.3.2. Изучение серопревалентности возбудителей болезней
свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.1. Характеристики применённых тест-систем
3.3.2.2. Серопревалентность исследуемых возбудителей
в группах доращивания хозяйств ЦФО РФ
3.3.2.2.1. Серопревалентность возбудителя РРСС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.2.2. Серопревалентность М.Нуорпеитопіае в группах
доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.2.3. Серопревалентность РКВС в группах доращивания
свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.2.4. Серопревалентность цирковируса 2 типа в
группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.2.4.1 Серопревалентность парвовируса в группах
доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.2.2.5. Серопревалентность ротавируса в группах
доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.3. Распространение комплекса респираторных болезней
Свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ
3.3.3.1. Диагностическая значимость проведённого исследования
3.3.3.2. Модель факторного взаимодействия РРСС, ЦВС,
М. Нуорп витопіае, РКВС
3.3.3.3. Анализ количественной связи РРСС, ЦВС, М.Нуорпеитопіае,
РКВС с клиническими проявлениями респираторных расстройств
3.3.3.4. Объединённая модель факторного взаимодействия РРСС, ЦВС, М.Нуорпеитопіае, РКВС при комплексе респираторных болезней
свиней в ЦФО РФ у поросят групп доращивания
4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

2.10. Метод иммуиоферментного анализа в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний
При диагностике инфекционных заболеваний, в том числе и вирусной природы, наиболее распространёнными являются методы серологической диагностики. Среди них наибольшую популярность приобрел иммунофсрментный анализ (ИФА), как один из наиболее чувствительных и специфичных методов, позволяющий быстро получить результат и исследовать одновременно большое количество образцов, в том числе с привлечением средств автоматизации [7,8,18].
Метод твердофазного иммуиоферментного анализа, возникший в 70-80-е годы, в настоящее время широко используется для исследований. Принцип ИФА основан на выявлении комплекса антиген-антитело за счет использования конъюгированных с ферментом антител, которые, в свою очередь, обнаруживаются по окрашиванию при взаимодействии с хромогенным субстратом. Интенсивность окраски с высокой точностью фиксируется спектрофотометрически. Достоинствами ИФА являются оперативность постановки анализа, небольшие объемы исследуемых проб и возможность автоматизации всех стадий выполнения реакции, включая регистрацию получаемых результатов. Очевидно, что для проведения массового обследования животных при оценке напряженности иммунитета ИФА является наиболее перспективным методом. Кроме того, этот метод может быть использован для выявления вирусного антигена в полевых пробах.
Для оптимизации метода (особенно при постановке реакции в одном разведении сыворотки) необходимо учитывать ряд одинаково важных факторов, а именно: условия иммобилизации, качество конъюгированного фермента, режим инкубации.
В зависимости от цели исследования, серологические тесты могут быть как качественными, так и количественными. Например, если он используется для выявления инфекции на ферме или установления возможной