Бактериологическая диагностика и морфологическая характеристика тканей и органов перепелов при экспериментальном эшерихиозе

• Автор: Мансурова, Екатерина Анатольевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Перепеловодство как отрасль птицеводства
1.2. Этиологическая структура болезней перепелов
1.3. Циркуляция Е. coli в птицеводческих хозяйствах, источники и пути
заражения птицы
1.4. Диагностика и профилактика эшерихиоза птиц
СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клинико-морфологические методы исследований
2.2. Бактериологические методы исследований
2.3. Методы изучения гемолитических свойств, чувствительности к желчи и
антибиотикам
2.4. Методы изучения патогенных свойств микроорганизмов Е. coli
2.5. Методы статистической обработки результатов исследований
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Клинические признаки, особенности течения болезни, гематологические и
биохимические показатели перепелов при экспериментальном
эшерихиозе
3.2. Результаты изучения динамики морфологических изменений тканей и органов
перепелов при экспериментальном эшерихиозе
3.3. Результаты изучения колонизационной резистентности кишечника и
диссеминации эшерихий в ткани и органы перепелов при экспериментальном
эшерихиозе
3.4. Результаты изучения гемолитических свойств, чувствительности к желчи
и антибиотикам Escherichia coli, выделенных при эшерихиозе перепелов
3.5. Результаты изучения патогенных свойств Escherichia coli, выделенных из
патматериала и feces перепелов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В структуре инфекционной патологии птиц в 2012 г из числа заразных болезней удельный вес эшерихиоза составил 53,9 %, среди павших птиц - 92,0 % (Бобылева Г.А., 2013). Эшерихиоз птиц протекает в виде септицемии (Colicepticaemia avium), сальпингита и колигранулематоза (Бессарабов Б.Ф., 1980, 2007; Тугаринов O.A., 1983; Стрельников А.П., 1987; Пирожков М.К., 1989; Радчук H.A., 1990; Жаров A.B., 1995; Кунаков A.A., 1995; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Селезнев С.Б., 2000; Куриленко А.Н. и соавт., 2005; Борисенкова А.Н. и соавт., 2004; Светоч Э.А., 2004; Крупальник В.Л., 2005; Хатько Н.Ф., 2005; Сидорчук A.A., 2007; Кожемяка Н. В., 2008; Кононенко А.Б. и соавт., 2009; Ленченко Е.М. и соавт., 2013; Samelson L.E., 1985; StanleyV.G. etal., 1996; Collins, 2001; Janice Y.C., 2011). При идентификации из-за узкого спектра и невысокой чувствительности существующих наборов «О-коли сывороток» не типируется 49,0-54,3 % культур микроорганизмов E.coli. Схему бактериологической диагностики эшерихиоза завершает биологическая проба, характеризующаяся сложностью воспроизведения, чрезвычайной продолжительностью по времени исполнения. Восприимчивость лабораторных моделей зависит от вирулентности возбудителя, дозы, метода введения, чувствительности к термолабильным и термостабильным токсинам (Каврук Л.С., 1994; Светоч Э.А., 2000; Капустин A.B., 2001; Скородумов Д.И. и соавт., 2005; Рождественская Т.Н., 2011). При доместикации в неестественной среде обитания ограниченное территориальное пространство, нетрадиционное кормление являются основными причинами развития патологических процессов диких, экзотических и декоративных птиц (Бессарабов Б.Ф., 2005; Ежков В.О., 2008; Пименов Н.В., 2012). В частности, на перепелиных фермах технологии содержания птицы существенно отличаются от природных условий, что приводит к снижению уровня показателей естественной резистентности организма птицы (Паникар И.А. и соавт., 1992; Гущин В.В., 2003; Шваб A.A., 2006; Белогуров
А.Н., 2009). Циркулирующие в перепелиных хозяйствах штаммы

микроорганизмов E. coli были представлены серогруппами: 078, 0111, из числа выделенных 61,53 % имели адгезивные антигены: К88ав, К88ас, К99, 987Р и F41, летальность перепелов при эшерихиозе составляла 97,25 %, сальмонеллезе -
78,7 % (Паникар И.А. и соавт., 1995; Булгакова И.А., 1997; Панасенко A.C., 2008). При заражении Micobacterium avium у перепелов развивались изменения, характерные для туберкулеза (Бушмелева П. В., 2011). При желудочно-кишечных болезнях в микробиоценозах кишечника перепелов увеличивалось содержание патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, в том числе E.coli (Шмидт Г.О., Плешакова В.И., 2012). Учитывая, что степень реализации потенциальной патогенности микроорганизмов определяется восприимчивостью макроорганизма, актуальность представляют исследования по воспроизведению инфекционного процесса на восприимчивых лабораторных моделях для изучения динамики патологических процессов, апробация и подбор эффективных диагностических сред, тест-систем для индикации и дифференциации микроорганизмов Escherichia coli.
Цель работы - изучить клинические признаки, особенности течения болезни, морфологические изменения, колонизационную резистентность кишечника, диссеминацию бактерий в ткани и органы перепелов при экспериментальном эшерихиозе.
Задачи исследований:
изучить клинические признаки, особенности течения болезни, гематологические, биохимические показатели сыворотки крови перепелов при экспериментальном эшерихиозе;
- изучить динамику морфологических изменений тканей и органов перепелов при экспериментальном эшерихиозе;
определить колонизационную резистентность кишечника и диссеминацию бактерий в ткани и органы перепелов при экспериментальном эшерихиозе;
- изучить гемолитические свойства, чувствительность к желчи и

Срезы толщиной от 5 до 7 мкм образцов залитых в парафиновые блоки получали на санном микротоме «МС-2» (Россия). Для быстрого приготовления срезов от 4 до 60 мкм использовали замораживающий микротом «Миконта» (Россия).
Срезы для общих целей окрашивали гематоксилином и эозином, соединительную и мышечную ткани - по Ван Гизону, жир - Суданом III, микроорганизмы - по Крантцу.
Для окрашивания гематоксилином и эозином срезы переносили из воды в раствор гематоксилина на 1-3 мин, и промывали в воде 3-5 мин; помещали в раствор эозина на 3-5 мин, и промывали водой 3-5 мин. Для обезвоживания наносили каплю 96° этилового спирта на 1-2 мин, просветляли в 25,0 %-ом растворе карболовой кислоты, в ксилоле, наносили 1-2 капли канадского бальзама и закрывали покровным стеклом.
При окраске соединительной и мышечной ткани по Ван Гизону использовали пикрофуксин, для этого 150 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты смешивали с 3,0-5,0 мл насыщенного водного раствора кислого фуксина; к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты добавляли 10 мл 1,0 % водного раствора кислого фуксина. Срезы переносили из воды в раствор гематоксилина на 2-3 мин, и промывали в проточной воде 5-7 мин; помещали в раствор пикрофуксина на 2-3 мин, и промывали водой 3-5 сек, обезвоживали в 96° этиловом спирте 1-2 мин, просветляли в 25,0 %-ом растворе карболовой кислоты, в ксилоле, наносили 1-2 капли канадского бальзама и закрывали покровным стеклом.
Срезы извлекали из воды и опускали на 5 минут в раствор гематоксилина, сполоснув водой срезы переносили на 3-5 минут в пикрофуксин, быстро сполоснув водой, обезвоживали в 70,0 %-ном и 96%-ном растворе этилового спирта по 15-20 с. Затем срезы просветляли в карбол-ксилоле и ксилоле. Заключение срезов проводили в канадский бальзам.
Для окрашивания жировой ткани в 95 см3 85° этилового спирта добавляли
5 см3 ацетона и насыпали порошок судана III. Смесь нагревали до 50° С, затем