Определение состава и качества меда методом ВЭЖХ

• Автор: Романов, Алексей Валерьевич
• Шифр специальности: 05.11.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : ил.

Принятые обозначения и сокращения
В работе используются следующие сокращения:
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГЖХ - газо-жидкостная хроматография
ТСХ - тонкослойная хроматография
ГХ - газовая хроматография
МС - масс- спектрометрия
МС/МС - тандемная масс- спектрометрия
БАД - биологически активная добавка
5-ГМФ - 5-гидроксиметилфурфураль, 5-гидроксиметил-2-фуральдегид САР - Chloramphenicol, хлорамфеникол, левомицетин EtAc - этилацетат
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота РСО - рабочий стандартный образец ПДК - предельно допустимая концентрация ПФ - подвижная фаза ЕС - Европейский союз

1. Введение
Содержание работы

2. Обзор литературы
2.1. Углеводный состав меда
2.2. 5-ГМФ в меде
2.3. Антибиотики в меде
2.4. Флавоноиды в продуктах пчеловодства
3. Экспериментальная часть
3.1. Определение углеводного состава меда
3.2. Определение 5-ГМФ в меде
3.3. Определение антибиотиков в меде
3.3.1. Определение хлорамфеникола (САР) в меде
4. Обсуждение результатов
4.1. Углеводный состав меда
4.2. 5-ГМФ в меде
4.3. Определение хлорамфеникола (САР) в меде
5. Выводы
6. Список литературы

1. Введение
Значение меда трудно переоценить ввиду того, что входящие в его состав вещества имеют огромное значение в пищевой промышленности и медицине. Мед является естественным природным продуктом и используется человечеством на протяжении всей его истории. Однако, пристальное внимание науки к его составу и свойствам появилось относительно недавно.
В настоящее время известно, что основную часть пчелиного меда составляют углеводы (глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза и др.). Их общее содержание достигает 80%. Глюкоза и фруктоза составляют 80-90% от суммы всех сахаридов в созревшем меде, сахароза — до 5%. Вода составляет порядка 18%, в зависимости от типа и зрелости меда. Оставшиеся 2-3% составляют микроэлементы и различные полифенольные соединения, обеспечивающие лечебные и антиоксидантные свойства меда.
Состав меда строго регламентируется нормами ГОСТ [1]. Однако эти нормы опираются на устаревшие методы анализа, зачастую не способные дать достоверные результаты. Так, описанный в ГОСТ 19792-2001 метод определения углеводного состава меда основан на определении оптической плотности раствора феррицианида калия после того, как он прореагирует с редуцирующими сахарами меда. Метод испытания включает определение сахаров меда до и после инверсии. Данный метод анализа является косвенным и не позволяет определить количественное содержание каждого из моносахаридов. Также он не позволяет однозначно определить содержание сахарозы, поскольку в меде может содержаться мальтоза и другие ди- и олигосахариды. Например, при искусственном добавлении пищевого сахара в прикорм пчел в меде увеличивается содержание олигосахаридов, что может нанести вред при употреблении такого меда в пищу людям, страдающим сахарным диабетом. Стандартный метод дает общую картину наличия олигосахаридов, но не позволяет определить содержание каждого из них.
Аналогичная ситуация наблюдается и при определении остальных компонентов меда. Так, метод определения 5-ГМФ основан на его спектро-

3.1. Определение углеводного состава меда.
При разработке методики стандартный раствор готовили по точной навеске. Для обеспечения длительного хранения стандартный раствор смешивали с ацетонитрилом Lecbiopharm в объемном соотношении 1/1. Рабочие растворы стандартов готовили разбавлением стандартного раствора смесью вода-ацетонитрил с объемным соотношением 1/1.
При анализе образцов меда растворы готовили следующим образом: 1г исследуемого меда (точная навеска) растворяли в 50 мл воды для ВЭЖХ. Раствор перемешивали до полного растворения меда в УЗ - ванне при комнатной температуре в режиме «перемешивание». Затем раствор фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 микрон. Фильтрат смешивали с ацетонитрилом в объемном соотношении 1/1 и анализировали методом ВЭЖХ.
В процессе отработки методики были определены условия анализа:
- режим элюирования изократический, состав подвижной фазы ацетонитрил/вода в объемном соотношении 82/18 без смешения из двух отдельных емкостей. Состав подвижной фазы может варьироваться для достижения полного разделения пиков глюкозы и фруктозы.
- объемная скорость элюирования 1,0 мл/мин.;
- объем инжекции 10 мкл;
- температура термостата колонки 35°С;
- времена удерживания стандартов:
- фруктоза - 6,7 ± 0,2 мин
- глюкоза - 7,6 ± 0,2 мин
- сахароза - 11,1 ± 0,2 мин
- мальтоза - 12,8 ± 0,2 мин
Калибровочная зависимость сигнала детектора от содержания каждого углевода была определена в диапазоне концентраций 0,1 - 10,0 мг/мл (соответствует 10 - 1000 мг/кг меда) по 6 точкам, для каждой точки было