Внутриклеточные механизмы регуляции биосинтеза вазопрессина

• Автор: Черниговская, Елена Валерьевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 323 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ
ВСТУПЛЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика вазопрессинергической системы гипоталамуса 1?
1.1.1. Локализация вазопрессинергических нейронов
1.1.2. Структура и экспрессия гена вазопрессина, процессинг вазопрессина
1.1.3. Регуляция экспрессии гена вазопрессина
1.1.4. Выведение вазопрессина
1.1.5. Механизмы регуляции функции нейронов киназами ERK1/2 сигнального каскада
1.2. Регуляция функционального состояния вазопрессинергических нейронов
1.2.1. Осморегуляция
1.2.2. Неосмотическая регуляция вазопрессинергических нейронов
1.2.3. Участие норадреналина в регуляции функционального состояния вазопрессинергических нейронов гипоталамуса
1.2.4. Участие дофамина в регуляции функционального состояния вазопрессинергических нейронов гипоталамуса
1.2.5. Участие NO в регуляции функционального состояния вазопрессинергических нейронов гипоталамуса
1.2.6. Взаимодействие N0 и катехоламинов в регуляции функционального состояния вазопрессинергических нейронов гипоталамуса
1.3. Развитие вазопрессинергической системы гипоталамуса
1.3.1. Эмбриональное развитие вазопрессин- и окситоцинергических нейронов супраоптического и паравентрикулярного ядер
1.3.2. Развитие вазопрессинергической системы в постнатальном онтогенезе
1.3.3. Роль апоптоза в формирование вазопрессинергической системы гипоталамуса в пренатальном онтогенезе и у взрослых животных
1.3.3.1. Морфологическая характеристика апоптоза
1.3.3.2. Инициация апоптоза внешними сигналами
1.3.3.3. Роль митохондриального пути в инициации апоптоза
1.3.3.4. Инициация апоптоза внутриклеточными сигналами. Р53 опосредованная инициация апоптоза
1.3.3.5. Механизмы действия проапоптозного белка р53, не связанные с регуляцией апоптоза. Р53 в нервной системе
1.3.3.6. Подавление апоптоза. Роль Bcl-2-подобных белков в апоптозе.
1.3.3.7. Механизмы действия антиапоптозного белка Вс1-2, не связанные с регуляцией апоптоза. Вс1-2 в нервной системе
1.3.3.8. Особенности экспрессии каспазы-9 и Вс1-2 в эмбриогенезе и раннем постнатальном онтогенезе
1.4. Воздействия, приводящие к инициации апоптоза в нервной системе
1.4.1. Денервация
1.4.2. Роль NO в регуляции апоптоза
1.4.3. Влияние осмотической стимуляции на апоптоз вазопрессинергических нейронов
1.4.4. Роль катехоламинов в регуляции апоптоза
1.4.5. Морфогенетическое влияние различных факторов на развитие вазопрессинергической системы
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Экспериментальные модели
2.1.1. Модели in vitro
2.1.1.1. Инкубация переживающих срезов гипоталамуса в средах,
содержащих дофамин и норадреналин
2.1.1.2 .Инкубация переживающих срезов гипоталамуса в средах, содержащих блокаторы Вс1-2, р53 или ERK1/2 каскада — НА 14-1, Pifithrin-a или U0126 соответственно
2.2. Модели in vivo
2.2.1. Блокада синтеза катехоламинов на фоне активации вазопрессинергической системы гипоталамуса у крыс
2.2.2. Блокада синтеза катехоламинов на фоне активации вазопрессинергической системы гипоталамуса у мышей дикого типа и мышей-нокаутов по гену nNOS
2.2.3. Анализ сроков окончания пролиферации вазопрессинергических нейронов гипоталамуса
2.2.4. Блокада синтеза катехоламинов в ходе эмбрионального развития крысят
2.2.5. Изучение влияния сигнальных белков апоптоза на специфическую функциональную активность вазопрессинергических нейронов
2.2.6. Влияние водной депривации
2.2.7. Впутригипоталамическое введение блокаторов Вс1-2 или р53 -IIA14-1 или Pifithrin-a соответственно
2.2.8. Внутрибрюшинное введение блокатора Pifithrin-a
2.3. Обработка материала
2.3.1. Иммуногистохимический метод
2.3.2. Конфокальная микроскопия
2.3.4. Western blotting анализ
2.3.5. Метод гибридизации in situ
2.4. Морфофункциональный анализ материала
2.5. Статистический анализ результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Влияние катехоламинов и NO на функциональное состояние вазопрессинергических нейронов
3.1.1. Влияние дофамина и норадреналипа на функциональное состояние вазопрессинергических нейронов в экспериментах in vitro

ДНК и взаимодействия с регуляторными белками. Локализация участников МАРК каскада также является важнейшим фактором, определяющим адекватный транскрипционный ответ на внеклеточные сигналы. Многие транскрипционные факторы постоянно находятся в ядре, а другие могут перемещаться между цитоплазмой и ядром. МАРК сигнальные пути могут также участвовать в регуляции транслокации транскрипционных факторов в ядро, что способствует их активации или, напротив, стимулирует экспорт транскрипционных факторов из ядра, вызывая, таким образом, их инактивацию [Hood and Silver, 1999]. Например, неактивный ERK1/2 может быть заякорен в цитоплазме за счет связывания с его активатором МЕК, или с фосфатазой, или с регуляторным скэффолд-белком [Brunet, et al., 1999; Fukuda, et al., 1997; Whitmarsh and Davis, 1998]. При активации ERK1/2 фосфорилируется и отщепляется от этого якоря и может перемещаться в ядро и активировать свои мишени [Khokhlatchev, et al., 1998]. Не весь активированный ERK1/2 перемещается в ядро, часть его остается в цитоплазме за счет связывания с цитоскелетом или другими регуляторными белками [Reszka, et al., 1995]. По-видимому, подобные механизмы участвуют в контроле локализации и других членов МАРК каскада. Помимо регуляции собственной активации, вышеперечисленные механизмы определяют способность участников МАРК участвовать в регуляции целого ряда МАРК-несвязанных белков и сигнальных систем. Так показано, что с-Raf-l взаимодействует с белком Вс1-2 через белок Bag-1 и, встраиваясь во внешнюю мембрану митохондрий, усиливает антиапоптозное действие белка Вс1-2. Более того, Bag-1, в составе белкового комплекса cRaf/Bag-l/Bcl-2 может усиливать протеинкиназную активность cRaf in vitro и in vivo [Wang, et al., 1996].
Вторым важным механизмом регуляции активности транскрипционных факторов является контроль их количества. Количество белка определяется соотношением таких процессов, как синтез и деградация, интенсивность которых зависит от свойств конкретного белка и текущего статуса клетки. МАРК сигнальный путь регулирует экспрессию многих транскрипционных