Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Гоголев, Юрий Викторович
03.01.05
Докторская
2013
Казань
346 с. : ил. + Прил. (с. 143-346: ил.)
Стоимость:
499 руб.
ЧАСТЬ І
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Л. Оксилипины как биологически активные соединения
1.2. Метаболизм оксилипинов
1.3. Общая характеристика липоксигеназ
1.4. Специфичность действия липоксигеназ
1.5. Модели специфичности действия липоксигеназ
1.6. Третичная структура липоксигеназ
1.7. Липоксигеназа-3 кукурузы (ХтЕОХЗ)
1.8. Общая характеристика ферментов Р450
1.9. Общая характеристика ферментов семейства СУР74
1.10. Структурная организация ферментов семейства СУР74
1.11. Алленоксидсинтазы
1.12. Гидропероксидлиазы
1.13. Дивинилэфирсинтазы
1.14. Эпоксиалкогольсинтазы
1.15. Сравнение механизмов катализа цитохромов СУР74
и монооксигеназ Р450
1.16. Локализация ферментов СУР74
1.17. Регуляция экспрессии генов ферментов липоксигеназного
каскада
1.18. Молекулярная эволюция ферментов липоксигеназного каскада
1.18.1. Общие представления о молекулярной эволюции
1.18.2. Классификация и молекулярная филогения липоксигеназ
1.18.3. Классификация цитохромов семейства СУР74
1.18.4. Ферменты семейства СУР74 вне царства растений
1.18.5. Молекулярная филогения ферментов CYP74
1.19. Постановка цели
исследования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы биоинформатики
2.2. Подготовка растительного материала
2.3. Выделение тотальной РНК из листьев растений
2.4. Реакция обратной транскрипции и получение
двуцепочечной кДНК
2.5. Полимеразная цепная реакция
2.6. Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот
в агарозном геле
2.7. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.8. Молекулярное клонирование ДНК
2.8.1. Характеристика бактериальных штаммов
2.8.2. Среды для культивирования бактерий
2.8.3. Приготовление компетентных клеток E
2.8.4. Перенос плазмид в компетентные клетки E
2.8.5. Клонирование ПЦР-фрагментов
2.8.6. Клонирование полноразмерных кДНК
2.8.7. Клонирование целевых генов в экспрессирующие векторы
2.9. Сайт-направленный мутагенез клонированных генов
2.10. Наработка и очистка рекомбинантных белков
2.10.1. Выращивание культур продуцентов и индукция синтеза рекомбинантных белков
2.10.2. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном
геле
2.10.3. Выделение и очистка рекомбинантных белков
2.11. Реактивы и материалы для исследований катализа рекомбинантных ферментов
2.12. Получение препаратов из растительного материала и подготовка субстратов
2.12.1. Получение препаратов ацетонового порошка семян
2.12.2. Получение препаратов свободных жирных кислот
2.12.3. Получение препаратов гидроперекисей жирных кислот
2.13. Кинетические исследования реакций липоксигеназного
каскада
2.14. Анализ продуктов реакций липоксигеназного каскада методами высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
2.14.1. Хроматография на обращенной фазе
2.14.2. Хроматография на нормальной фазе
2.15. Спектральные исследования
2.15.1. Подготовка образцов для ГХ-МС
2.15.2. Проведение экспериментов по ГХ-МС
2.15.3. Получение спектров оптического поглощения
2.15.4. Получение ЯМР-спектров
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение рекомбинантного фермента 2тЬОХЗ
3.1.1. Экспрессия ХтЬОХЗ в бактериальном продуценте
3.1.2. Очистка рекомбинантного фермента ХшЬОХЗ
3.2. Окисление линолевой и линоленовой кислот при участии
ZmLOXЗ и ОтЬОХ1
3.3. Участие (78)-гидроперекиси 16:3 в липоксигеназном пути
3.4. Направленная модификация первичной структуры ЯгпЬОХЗ
3.4.1. Создание мутантных форм ЯтЬОХЗ
3.4.2. Окисление линолевой кислоты мутантными формами
гтЬОХЗ
3.4.3. Окисление сложных липидов 2тЬОХЗ и 2тЬОХЗА1а56201у
3.5. Моделирование механизма ферментативного действия ХтЬОХЗ
3.5.1. Трехмерная модель ХтЬОХЗ
Липоксигеназа полученная из липидных телец огурца проявляла необычную активность при окислении арахидоновой кислоты. При этом образовывались (155г)-гидроперокси-(5 Z, 8Z, 11Z, 1 ЗЕ)-э йкозатетераеновая
кислота и (85)-rHflponepoKCH-(5Z,9£,l lZ,14Z)-3fiK03aTeTepaeH0Baa кислота в соотношении 4:2. При связывании с липидными каплями, активность липоксигеназы увеличивалась более чем в 4 раза и изменялась позиционная специфичность; среди продуктов реакции преобладала (85)-гидроперокси-(5Z,9£,1lZ,14Z)-3ftK03aTeTepaeH0Baa кислота [Feussner, Kuhn, 1995].
Липоксигеназа выделенная из плодов томата предпочитала в качестве субстрата линолевую, но не линоленовую, арахидоновую, 11,14-эйкозадиеновую и 11,14,17-эйкозатриеновую кислоты. При этом линолевая кислота преобразовывалась ферментом до (95)-гидроперокси-( 1 OE, 12Z)-октадекадиеновой, арахидоновая кислота - до смеси (5S)-, (11 S')- и (8S)-гидроперекисей [Regdel et al., 1994]. При окислении арахидоновой кислоты при участии (12/?)-ЛОГ красной водоросли Gracilariopsis lemaneiformis сначала синтезировалась (125)-rHflponepoKCH-(5Z,8Z, 1 OE, 14Д)-эйкозатетраеновая
кислота, которая далее преобразовывалась в (12/?, 135*)-дигидрокси-эйкозатетраеновую кислоту [Hamberg, Gerwick, 1993]. Окисление проходило исключительно по (п-2) типу при участии разных пентадиеновых фрагментов арахидоновой кислоты.
Таким образом, окисление жирных кислот при участии липоксигеназ происходит, в основном, по одному и тому же типу, в то время как позиция углерода прохирального центра пентадиеновой группы, от которой происходит удаление водорода на первом этапе липоксигеназной реакции, может различаться.
Достаточно много исследований было посвящено влиянию положения пентадиенового фрагмента относительно углеродной цепи жирной кислоты и дополнительных группировок, связанных с метальной и карбоксильной группами. В ряде экспериментов использовались дикарбоновые жирные кислоты с разным количеством и положением двойных связей, а также
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Митохондрия как критическое звено в ответе растительной и дрожжевой клетки на тепловое воздействие | Рихванов, Евгений Геннадьевич | 2012 |
Влияние триэтаноламина и его производных на рост и термотолерантность растений | Шигарова, Анастасия Михайловна | 2010 |
Исследование антиоксидантной роли пролина у галофитов и участия АФК в регуляции его биосинтеза | Бакулина, Екатерина Андреевна | 2010 |