Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты

• Автор: Владыченская, Елизавета Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
1. Введение
2. Обзор литературы
2.1 Форменные элементы крови - краткая характеристика
2.2. Гомоцистеин и гомоцистеиновая кислота
2.3. Глутаматные рецепторы в нервной и иммунной
системах
2.3.1. Глутаматные рецепторы в нейронах
2.3.2. Глутаматные рецепторы в лимфоцитах
2.4. Роль свободных радикалов в нейронах и клетках крови
2.4.1. Источники свободных радикалов в нервных клетках
2.4.2. Источники свободных радикалов в лимфоцитах
A) НАДФН-оксидаза - источник АФК в лимфоцитах
Б) Участие РКС и Р1-3-киназы в свободнорадикальной
продукции
B) ИО-синтаза - источник радикала в лимфоцитах
3. Материалы и методы
3.1.Объекты исследования
3.1.1. Выделение лимфоцитов
3.1.2. Подсчет клеток в камере Горяева
3.1.3. Первичная культура периферических лимфоцитов
3.2 Методы исследования
3.2.1. Использование проточной цитометрии для характеристики клеток

3.2.2. Использование различных флуоресцентных зондов для характеристики клеток
A) Измерение уровня свободных радикалов
Б) Измерение количества ионизированного кальция
B) Окраска лимфоцитов с помощью антител
Г) Определение доли мертвых клеток
Д) Связывание цитоплазматического кальция
Е) Определение уровня свободных радикалов в
митохондриях
3.2.2. Количественное определение 1Р1Ч-у и ТТЕ-а с помощью иммуноферментого анализа
3.2.3 Обработка результатов
4. Результаты
4.1. Характеристика действия ГЦ и ГЦК на лимфоциты
4.2. Обнаружение функционально активных МУГОА-рецепторов на
мембране лимфоцитов периферической крови крыс
4.3. Исследование действия ГЦК на 1ЧМЕ)А-рецепторы лимфоцитов
4.4. Исследование роли РКС и Р1-3 киназы в активации лимфоцитов ГЦК
4.5. Источники свободных радикалов при активации лимфоцитов ГЦК
4.6. Влияние ГЦ и ГЦК на продукцию цитокинов лимфоцитами крыс
5. Обсуждение результатов
6. Выводы
7. Благодарности
8. Список литературы

Однако существуют данные, указывающие на возможное взаимодействия хелеритрина и с другими белками. Так, известно, что хелеритрин индуцирует апоптоз в полимофрноядерных лейкоцитах через активацию каспазы-3 [Sweeney et al., 2000]. Кроме этого, анализ клеток, переживших апоптоз, указывает на вовлеченность в этот процесс ингибирование противоапоптотического ингибитора BclXL [Chan et al., 2003; Wan et al., 2008].
PI-3 киназа (PIP3 киназа]
PI-3 киназа (фосфоинозитол-3 киназы) также играет важнейшую роль в метаболизме лимфоцитов. PI-3 кинза катализирует превращение PIP2 (который также является субстратом и для фосфолипазы С) в несколько фосфатидилинозитидов - PI-3,4,5-P3, PI-3,4-P2, PI-3-P. Эти вещества выполняют роль вторичных мессенджеров, в частности, взаимодействуют с определенными изоформами протеинкиназы С [Singh et al., 1993].
Каскад реакций, регулируемый PI-3 киназой, является одним из основных путей, активация которых происходит под действием ТкР, интерлейкин-2Ы и CD28, что в конечном итоге ведет к активации и делению Т-клеток. Было создано несколько моделей, дефицитных по различным участникам PI-3 сигнального пути. Оказалось, что повреждения в PI-3 сигнальном пути ведут к нарушениям в регуляции иммунной системы, а в некоторых случаях и к аутоиммунным заболеваниям [Kashiwada et al., 2007].
Было показано, что при образовании «иммунологического синапса» между Т-лимфоцитами и антигенпрезентирующей клеткой наблюдается длительная продукция 3-фосфатидилинозитидов в Т-клетках, посредством чего фософатидилинозитол-3,4,5-трисфосфат (PIP3) накапливается на клеточной мембране [Harriague et al., 2002].
В нейронах гиппокампа мыши PI-3 киназа находится в комплексе с АМРА-рецепторами. PI-3 киназа фосфорилируется под действием