Роль ферментов биосинтеза холестерина в подавлении развития KRAS-опосредованного онкогенеза

• Автор: Габитова, Линара Рустамовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 104 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Метаболизм холестерина в процессе злокачественной трансформации клетки

1.2 Биосинтез холестерина и роль его промежуточных метаболитов. Окскстсролы

1.3 Регуляция гомеостаза холестерина в клетке

1.3.1 Печеночный X рецептор. Общее представление о работе рецептора и его лигандах

1.3.2 Роль печёночного X рецептора в регуляции гомеостаза холестерина

1.3.3 Печеночный X рецептор как мишень для воздействия на опухолевую клетку

1.4 КБав онкоген шли белок
1.4.1 Структура КБав и его посттрансляционная липидная модификация как необходимый этап «созревания» белка
1.4.2 Место и роль КБав белка в системе внутриклеточных сигнальных путей. Последствия мутаций А-гах гена
1.5 Современные методы лечения злокачественных опухолей, вызванных нарушениями работы КБав и ЕСББ. Перспективы воздействия на метаболизм холестерина в таких типах раковых заболеваний
1.6 Заключение
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Реактивы и оборудование
2.2 Объекты исследования
2.2.1 Объекты исследования in vitro
2.2.2 Объекты исследования in vivo
2.3 Исследование кожных папиллом in vivo
2.4 Анализ уровня экспрессии генов методом количественной ПЦРс обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)
2.5 Препарация и анализ образцов кожи мышей
2.6 Трансфекция клеток малой интерферирующей РНК
2.7 Анализ жизнеспособности клеток in vitro
2.8 Анализ уровня экспрессии белков методом Вестерн Блот
2.9 Анализ активации LXR с использованием люцнферазного репортёра
2.10 Получение стабильных клонов SCC61 с повышенной экспрессией белка LXRa
2.11 Окрашивание клеток на р-галактозндазу, связанную со старением
2.12 Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Влияние конститутивного и тамоксифен-обусловленного удаления NSDHL на пролиферацию кератиноцнтов мышей in vivo
3.2 Влияние удаление NSDHL на появление и развитие KRasG12D-опосредованных кожных папиллом in vivo
3.3 Влияние удаления NSDHL на скорость роста и процесс нмморталнзации KRasG12D -мутантных первичных мышиных эмбриональных фибробластов
3.4 Активация экспрессии мишеней LXR в кератнноцитах мышей при удалении NSDHL в экспериментах in vivo
3.5 Активация экспрессии мишеней LXR в NSDHL-дефнцнтных мышиных эмбриональных фибробластах in vitro
3.6 Активация LXR при удалении NSDHL в экспериментах с люцнферазным репортёром in vitro
3.7 Влияние удаления NSDHL и SC4MOL на активацию мишеней LXR в опухолевых клетках SCC61 и А
3.8 Обратимость эффекта активации экспрессии мишеней LXR в результате выключения вышележащего по пути биосинтеза холестерина фермента CYP51A
3.9 Влияние LXRa и LXRP на возникновение эффектов, обусловленных удалением NSDHL в опухолевых клетках
3.10 Повышение чувствительности опухолевых клеток SCC61 к агонистам LXR при повышении экспресии LXR в этих клетках
3.11 Влияние нарушения гомеостаза холестерина на чувствительность
опухолевых клеток к ингибиторам рецептора EGFR
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Додецилсульфат натрия Ингибиторы протеаз Ингибиторы фосфатаз Компактин
Краситель трипановый синий Кукурузное масло Лентивирус, содержащий люциферазный репортёр Лизирующий буфер РЬВ Лизирующий буфер ЛІРА Люциферазный субстрат
Sigma-Aldrich (США) Thermo Scientific (США) Thermo Scientific (США) Santa Cruz (США) Sigma-Aldrich (США) Sigma-Aldrich (США)
LXR Qiagen (США)
Promega (США) Sigma-Aldrich (США)
миРНК
Promega (США) Qiagen (США)
• Набор для анализа экспресии р- Cell Signaling (США) галактозидазы, связанной со старением
«Galactosidase Staining Kit»
• Набор для визуализации антител, Thermo Scientific (США) меченных пероксидазой хрена (HRP)
«SuperSignal West Pico Stable Peroxide Solution and Luminol Enhacer Solution»
• Набор для выделения РНК «RNeasy Mini Qiagen (США)

• Набор для определения концентрации Thermo Scientific (США) белка «Pierce ВСА Protein Assay Reagents
А, В»
• Набор для определения уровня Life Technologies (США) холестерина «Amplex Red kit»
• Первичные антитела к Е-кадгерин Cell Signaling (США) (#3195Р), ß-актин (#4967S), а-тубулин (#3873S), НА-таг (#2367S)