+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Использование белковых и пептидных векторов для избирательной доставки противоопухолевых препаратов и терапевтических олигонуклеотидов в опухолевые клетки

  • Автор:

    Посыпанова, Галина Ароновна

  • Шифр специальности:

    03.01.04

  • Научная степень:

    Докторская

  • Год защиты:

    2013

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    256 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Основные идеи и пути создания противоопухолевых препаратов
направленного действия
1.1.1. Препараты направленного действия в онкологии: лекарственные препараты на основе моноклональных антител и антисмысловых
олигонуклеотидов.
1.2. Рецептор-опосредованный эндоцитоз и его роль в доставке биологически-
активных соединений в клетки-мишени
1.3. Альтернативные системы адресной доставки противоопухолевых
препаратов для повышения эффективности терапии рака.
1.4. Опухолево-специфические антигены как мишени адресной доставки противоопухолевых препаратов
1.5. Адресная доставка лекарственных препаратов в составе конъюгатов с
белковыми и пептидными векторными молекулами.
1.6. Химерные Белки
1.7. Альфа-фетопротеин и его рецепторы в качестве мишени избирательной
доставки биологически активных веществ в опухолевые клетки.
1.7.1. Структура и функции альфа-фетопротеина
1.7.2. Рецепторы альфа-фетопротеина.
1.7.3. Биологически активные фрагменты альфа-фетопротеина
1.8. Адресная доставка противоопухолевых препаратов как основной подход к преодолению множественной лекарственной устойчивости (МЛУ)
1.8.1. Феномен множественной лекарственной устойчивости опухолевых
клеток.
1.8.2. Современные подходы к преодолению множественной лекарственной устойчивости.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Выделение природного альфа-фетопротеина человека и получение рекомбинантных белков-фрагментов АФП.
2.1.1. Выделение АФП человека
2.1.2. Получение рекомбинантного С-концевого фрагмента АФП (гАФП27)
2.1.3. Получение рекомбинантного белка PGA
2.1.4. Получение рекомбинантного фрагмента АФП AFP-3BC
2.2. Синтез конъюгатов белков и пептидов с FITC, цитостатиками и
олигонуклеотидами.
2.2.1. Синтез FITC-меченых АФП, МАт и С-концевого фрагментов АФП -
гАФП27 и AFP-3BC.
2.2.2. Синтез FITC-меченого октапептида АФП GIP8.
2.2.3. Синтез конъюгатов АФП, гАФП27, AFP-3BC и октапептида
EMTPVNPG (GIP8) с доксорубицином.

2.2.4. Синтез конъюгатов АФП с винбластином.
2.2.5. Синтез конъюгатов АФП с фталоцианинами
2.2.6. Синтез конъюгатов АФП и GIP8 с эсперамицином Aib (EsA).
2.2.9. Синтез конъюгатов АФП с олигонуклеотидами.
2.2.10. Получение комплексов ON с белками.
2.3. Культуры клеток и условия культивирования.
2.4. Оценка связывания с рецептором и эндоцитоза флуоресцентно меченых
белков, пептидов и конъюгатов с помощью метода проточной цитометрии.
2.4.1. Оценка связывания АФП и МАт с рецептором АФП.
2.4.2. Оценка эндоцитоза флуоресцентно меченных АФП, С-концевого
фрагмента АФП, октапептида АФП GIP8.
2.5. Оценка эндоцитоза конъюгатов белков и пептидов с ДОКС с помощью
метода проточной цитометрии.
2.6. Иммуноцитохимические и иммуногистохимические исследования.
2.6.1. Исследование экспрессии рецепторов АФП на поверхности клеток.
2.6.2. Исследование экспрессии белков с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70.
2.6.3. Иммунохимическое окрашивание гистологических срезов.
2.7. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgp 170 в опухолевых клетках.
2.7.1. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70 с помощью Western
blot.
2.7.2. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70 в опухолевых клетках с
помощью проточной цитометрии.
2.8. Флуоресцентная микроскопия.
2.9. Определение цитостатической активности препаратов in vitro.
2.9.1. Определение выживаемости клеток.
2.9.2. Определение ингибирования пролиферативной активности клеток.
2.9.3. Анализ уровня апоптоза с помощью флуоресцентной микроскопии.
2.8.4. Определение фотоцитостатической и хемиоцитостатической активности конъюгатов АФП с фталоцианинами алюминия (А1Фц) и кобальта (СоФц).
2.9. Исследование пролиферативной активности клеток.
2.10. Анализ клеточного цикла с помощью проточной цитометрии.
2.11. Исследование противоопухолевой активности препаратов in vivo.
2.12. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Исследование экспрессии рецептора альфа-фетопротеина на клетках
опухолевых линий человека.
3.1.1. Исследование специфичности клонов МАт к АФПР
3.1.2. Оценка количества АФПР на культивируемых in vitro опухолевых
клетках человека.
3.2. Иммунохимическое выявление АФПР на клетках и срезах тканей
3.2.1. Исследование экспрессии рецепторов АФП на поверхности опухолевых
клеток с помощью иммуноцитохимии.
3.2.2. Иммуногистохимическое окрашивание срезов опухолевых тканей
3.3. Исследование связывания и эндоцитоза флуоресцентно меченного АФП опухолевыми клетками in vitro.

3.3.1. Исследование связывания АФП с рецептором на поверхности опухолевых клеток и нормальных лимфоцитов периферической крови
человека с помощью проточной цитометрии.
3.3.2. Исследование эндоцитоза АФП in vitro с помощью проточной
цитометрии и флуоресцентной микроскопии.
3.4. Использование рецептор-опосредованного эндоцитоза для адресной доставки противоопухолевых препаратов - доксорубицина, винбластина, эсперамицина, фталоцианинов.
3.4.1. Анализ интернализации опухолевыми клетками in vitro конъюгатов
АФП с антибиотиками/цитостатиками на примере доксорубицина.
3.4.2. Исследование цитостатической активности конъюгатов белков с доксорубицином in vitro.
3.4.3. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов АФП с ДОКС
in vivo.
3.4.4. Исследование фотоцитостатической и хемиоцитостатической активности конъюгатов АФП с фталоцианинами алюминия (А1Фц) и кобальта
(СоФц).
3.4.5. Исследование цитостатической активности конъюгатов АФП с
некоторыми другими противоопухолевыми антибиотиками (цитостатиками).
3.4.6. Исследование цитостатической активности конъюгатов АФП с
эсперамицином Аш (EsA) in vitro.
3.4.7. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов АФП с эсперамицином Aib (EsA) in vivo.
3.5. Преодоление множественной лекарственной устойчивости, обусловленной экспрессией гена MDR 1 с помощью конъюгатов АФП с противоопухолевыми препаратами in vitro.
3.5.1. Характеристика резистентных линий клеток.
3.5.2. Анализ интернализации ДОКС и его конъюгатов с белками в
резистентных линиях клеток.
3.5.3. Исследование цитостатической активности конъюгатов ДОКС с АФП в отношении резистентных линий клеток.
3.6. Биологически активные фрагменты АФП.
3.6.1. Рекомбинантный С*концевой фрагмент АФП (гАФП27).
3.6.2. Рекомбинантный С-концевой фрагмент АФП АФП-ЗВС.
3.6.3. Биологически активный октапептид - фрагмент АФП
3.7. Адресная доставка антисмысловых олигонуклеотидов в опухолевые
клетки.
3.7.1. Адресная доставка антисмысловых олигонуклеотидов в опухолевые
клетки в виде их конъюгатов с АФП.
3.7.2. Исследование эффективности доставки ASON с помощью
нековалентных комплексов с АФП.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

взаимодействий ГДФ отделяется от молекулы динамина и замещается ГТФ, что ведет к отделению динамина от клатриновой оболочки. Далее динамин в комплексе с ГТФ олигомеризуется на шейке окаймленной ямки, при этом его ГТФазная активность возрастает в 50 раз. Гидролиз ГТФ приводит к изменению конфигурации динаминовой молекулярной пружины - она распрямляется и выталкивает окаймленный пузырек в цитоплазму. Содержащие ГДФ олигомеры динамина распадаются на мономеры [81].
После поступления в цитоплазму эндоцитозные пузырьки теряют клатриновую оболочку и быстро сливаются друг с другом, образуя ранние эндосомы. Разборка клатриновой оболочки на трискелионы осуществляется белком-шапероном Hsc70, а удаление адапторных белков происходит при участии фосфотазы ауксилина (которая рекрутируется к везикуле амфифизином), так как для удаления адапторных белков с поверхности пузырька необходимо дефосфорилирование инозитольного кольца мембранных липидов, к которым крепятся адапторные белки. Направленная полимеризация актина способствует перемещению везикулы.
Ранние эндосомы. Каждый эндоцитозный пузырёк содержит пару интегральных мембранных белков семейства SNARE - v-SNARE (vesicle) и t-SNARE (target). Взаимодействие комплементарных v- и t-SNARE обеспечивает слияние пузырьков. Слиянию предшествует развёртывание пар SNARE с участием NSF (N-этилмалеимид-чувствительный фактор, NEM-Sensitive Factor) и SNAP. Развёрнутые t-SNARE стабилизируются фактором, называемым LMA-1. t-SNARE одного пузырька располагается напротив v-SNARE другого пузырька. В это же время специфические факторы докинга (стыковки) (например, Rab5, обладающий ГТФазной активностью) приводят пузырьки в тесное соприкосновение друг с другом через RabS-ГДФ. Еще одним фактором докинга является ЕЕА1 (Early Endosome Associated Protein); его С-конец содержит домен FYVE finger, который связывается с фосфатидилинозитолтрифосфатом мембран везикул. ЕЕА1 активирует слияние везикул.
Ранние (периферические) эндосомы расположены по периферии клетки и содержат комплексы рецептора с лигандом, поступившие в клетку в ходе РОЭ. Эта структура называется "компартмент неразделённых рецептора и лиганда" (CURL - Compartment of Uncoupling of Receptor and Ligand). В мембране эндосом работающая протонная АТФаза создаёт внутри эндосомы кислую среду (pH 5.9-6.0), что способствует расщеплению комплекса лиганда с рецептором.
В эндосомах осуществляется сортировка эндоцитированных молекул. Судьба специфических рецепторов зависит от их функции: 1) они могут быть возвращены в те же самые области плазматической мембраны, откуда они были поглощены (это наиболее

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.124, запросов: 967