Влияние гидратированного фуллерена C60 в широком диапазоне концентраций на биологические тест-системы

• Автор: Яблонская, Ольга Игоревна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

Содержание
Содержание
Список сокращений
1. Введение
1.1. Актуальность работы
1.2.Цель работы
1.3. Задачи исследования
1.4. Научная новизна исследования
1.5. Практическая значимость
1.6.Основные положения, выносимые на защиту
1.7. Публикации
2. Обзор литературы по теме
2.1.Строение и свойства фуллерена
2.1.1. Структура фуллерена
2.1.2. Получение фуллеренов
2.1.3. Химия фуллерена
2.2.Истинные растворы гидратированного фуллерена Сбо (НуРп)
2.2.1. Метод получения НуРп
2.2.2. Особенности свойств водной оболочки НуРп
2.2.3. Биологическая активность НуРп
2.3.Сверхнизкие концентрации биологически активных веществ. Практические наблюдения и теоретические механизмы действия
2.4. Ферменты
2.4.1. Бактериальная люцифераза
2.4.2. Пероксидаза
2.4.3. Щелочная фосфатаза
2.5.Свободно-радикальные процессы в неразбавленной крови человека

2.5.1. Понятие активных форм кислорода (АФК)
2.5.2. Роль АФК в физиологических процессах
2.5.3. Хемилюминесценция как метод определения свободных радикалов
2.5.4. Люцигенин-зависимая ХЛ клеток и тканей
2.5.5. Роль АФК в патогенезе ХОБЛ
2.6.Клеточные модели как ключ к пониманию механизма
детерминации продолжительности жизни
2.7.Заключение: взаимосвязь НуР'п и АФК при воздействии на
ферменты, цельную кровь и культуру клеток
3. Материалы и методы исследования
3.1. Реактивы
3.2. Методы
4. Результаты исследования
4.1. Характеристика водного раствора фуллерена
4.2.Люцифераза
4.2.1. Изучение влияния НуБп в различных концентрациях ня активность люциферазы
4.2.2. Изучение влияния растворов НуБп на активность люциферазы после однократного воздействия высокой температуры
4.2.3. Изучение ферментативной активности люциферазы в глициновом буфере
4.2.4. Изучение влияния Ре2+на активность люциферазы в присутствии НуБп
4.2.5. Изучение влияния перемешивания на ферментативную активность люциферазы в присутствии НуБп
4.3.Щелочная фосфатаза
4.3.1. Изучение влияния растворов НуБп на активность

щелочной фосфатазы после ее нагревания
4.3.2. Изучение влияния условий хранения на срок хранения

4.3.3. Изучение влияния НуБп на активность щелочной фосфатазы при умеренной температуре
4.4.Пероксидаза
4.4.1. Влияние воздействия высокой температуры на активность пероксидазы в присутствии НуГп
4.4.2. Исследование влияния перемешивания на активность пероксидазы в присутствии НуРп
4.5.Неразбавленная кровь человека
4.5.1. Изучение влияния НуБп на кровь здоровых доноров
4.5.2. Исследование влияния НуБп на кровь пациентов с ХОБЛ
4.6. Клетки
4.6.1. Изучение влияния автоклавирования на свойства НуБп
4.6.2. Определение цитотоксических или митогенных свойств НуБп
4.6.3. Изучение влияния НуБп на кинетику роста клеток и их последующей гибели в стационарной фазе роста
4.6.4. Исследование влияние НуРп на эффективность образования колоний клеток
5. Обсуждение результатов
6. Выводы
7. Литература
Благодарности

На первой стадии каталитической реакции происходит
взаимодействие Н2О2 и Fe(III) в неактивном состоянии, в результате чего образуется Комплекс I - промежуточное состояние, содержащее железо (IV) и порфириновый катионный радикал (рис. 10). Далее происходит реакция восстановления при помощи субстрата с участием одного электрона, в результате чего субстрат переходит в радикальную форму, а порфириновый участок выходит из радикального состояния и переходит в Комплекс II. Комплексы I и И являются сильными окислителями. Следующая восстановительная реакция с переносом одного электрона приводит к изначальному состоянию фермента с железом (П1) и выделению молекулы воды. Сайт связывания субстрата находится между С]8 и С20 гема.
2.4.3. Щелочная фосфатаза
Щелочная фосфатаза (КФ 3.1.3.1) является одним из самых хорошо изученных ферментов. Она относится к классу гидролаз и катализирует реакцию гидролиза эфирных связей фосфомоноэфиров.
Щелочная фосфатаза - широко распространенный в природе фермент. Она открыта в микроорганизмах, низших растениях, в тканях млекопитающих, лимфе, плазме, лейкоцитах крови, молоке и т.д. В животных организмах этот фермент встречается почти во всех органах. Высока его концентрация в печени, костях, селезенке. Предполагается, что фермент участвует в транспорте фосфата.
Из всех выделенных в настоящее время щелочных фосфатаз наиболее изученной является щелочная фосфатаза Escherichia coli. Это металлофермент, содержащий цинк. При удалении Zn с помощью хелатирующих агентов получается апофермент, который может присоединять различные двухвалентные ионы :Mn2+, Со2+, Ni2+, Cd2+, Hg2+ и т. д.