Получение моноклональных антител к термолабильному энтеротоксину эшерихий

• Автор: Серебряков, Сергей Николаевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с.

Список сокращений

АГ - антиген
АЖ - асцитическая жидкость АМФ - аденозинмонофосфат АТ - антитело
АТч - антитела к энтеротоксину E.coli человеческого происхождения
АТс - антитела к энтеротоксину E.coli свиного происхождения
ББР - боратный буферный раствор
БСА - бычий сывороточный альбумин
ГГФРТ - гипоксантин-гуанозин-фосфорибозилтрансфераза
GM, GD, GT - ганглиозиды
Д - дальтон
ДДС - додецилсульфат натрия
ДЭАЗ - диэтиламиноэтил целлюлоза
ДМСО - диметилсульфоксид
ДНК-дезоксирибонуклеиновая кислота
ELISA - enzyme linked immunosorbent assay
ЕОП - единицы оптической плотности
ЗФР - забуференный физиологический раствор
ИГ - иммуноглобулин
IgG - иммуноглобулин класса G
ИОХ - ионообменная хроматография
ИФА - иммуноферментный анализ
ИЭФ - изоэлектрическое фокусирование
КВ - коэффициент вариации
КГ- конъюгат
КД -килодальтон
ЛПС - липополисахарид
LT - термолабильный энтеротоксин
LTh - термолабильный энтеротоксин человека
LTp - термолабильный энтеротоксин свиней
М.М. - молекулярная масса
мкАт - моноклональные антитела
MR - маннозорезистентные
MS - маннозочувствительные
О КЗ - острые кишечные заболевания
ПААГ - полиакриламидный гель
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РИА - радиоиммунный анализ
РНК - рибонуклеиновая кислота
ST - термостабильный энтеротоксин эшерихий
СФ - сульфатная фракция
CFA - фактор колонизации { colonisation factor antigen ) HAT -гипоксантин-аминоптерин-тимидин HT - гипоксантин-тимидин CT - холерный токсин
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ЭИКП - энтероинвазивные кишечные палочки ЭПКП - энтеропатогенные кишечные палочки ЭТКП - энтеротоксигенные кишечные палочки FCS - сыворотка плода коровы СБС - среда без сыворотки ПХ - пероксидаза хрена

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Причины возникновения кишечных инфекций
1.2. Факторы патогенности Е.соП
1.2.1.Адгезины энтеротоксигенных эшерихий
1.2.2.Энтеротоксины эшерихий
1.2.2.1.Термолабильный энтеротоксин
1.2.2.2.Строение и свойства и
1.2.2.3.Иммунологические свойства 1_Т
1.2.2.4.Генетический контроль синтеза 1_Т
1.2.3.Характеристика энтеротоксинов эшерихий других типов
1.2.4.Методы определения 1_Т
1.2.4.1 .Биологические методы определения И
1.2.4.2.Иммунохимические методы определения 1_Т
1.2.4.3.Другие методы детекции 1_Т
1.3.Гибридомная техника
1.3.1.Применение моноклональных антител
1.3.2. Перспективы исследований
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Иммунизация животных
2.2.Получение гибридом
2.2.1.Ведение клеточных культур
2.2.2.Слияние клеток
2.2.3.Клонирование гибридом
2.2.4.3амораживание клеток
2.2.5.Размораживание клеток
2.3.Получение препаративных количеств мкАт
2.4.Очистка мкАт

амплифицировать единственную молекулу ДНК (98, 113, 168, 194, 241).
1.3. Гибридомная техника.
Кёлером и Мильштейном в 1975 г была разработана и предложена технология создания клеточных гибридов - гибридом. Гибридома - это клеточная линия, объединяющая свойства обеих родительских линий ( В-лимфоцитов иммунизированного животного и культивируемых в питательной среде клеток миеломных штаммов ). От В- лимфоцита гибридомные клетки получают способность синтезировать определенные мкАт и способность выжить в селективной среде с НАТ( гипоксантин, аминоптерин, тимидин ); от миеломного партнера они получают способность бесконечно размножаться. Заслуга Кёлера и Мильштейна состоит в том, что они смогли объединить кажущиеся независимыми результаты исследований других ученых для создания гибридом, продуцирующих мкАт предоопределённой специфичности.
Такими важными результатами являются (120):
- доказательство теории клональной селекции (Nessal et Hederbery, 1958);
- развитие техники слияния клеток (Okida, 1962 .; Littlefield, 1964);
- исскуственная индукция плазмоцитом (Potter et Boyce, 1962) и их адаптация к условиям клеточных культур (Haribata et Harris, 1970);
- доказательство, что после слияния двух плазмоцетом образуется гибридома, которая производит иммуноглобулины обеих родительских линий (Cotton et Milstein, 1973).
За последние годы гибридомная техника была в значительной степени усовершенствована. Применение мкАт и методы их получения рассматриваются в обзорных работах (96, 104, 119, 216, 254). Среди наиболее перспективных методических подходов по получению гибридом следует отметить:
- культивирование миелом in vivo перед гибридизацией( Shi et al. 1987 г.) (220);
- предварительное замораживание спленоцитов иммунизированных животных ( Marusich 1988 г.) (172);