Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней

• Автор: Баян Дуламсурен
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 113 с.

1. Обзор литературы

1.1. Пастереллёзы сельскохозяйственных животных

1.2. Бактериальные вакцины

1.3. Изготовление противопастереллёзных вакцин

1.4. Основные методы контроля качества инактивированных бактериальных вакцин

1.5. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Штаммы микроорганизмов

2.1.2. Питательные среды

2.1.3. Подопытные животные

2.1.4. Бактериологические краски
2.1.5. Растворы и реактивы
2.1.6. Оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Методы изучения биологических свойств пастерелл
2.2.2. Определение количества живых микробных клеток
2.2.3. Световая микроскопия
2.2.4. Определение реактогенности масляного адъюванта
2.2.5. Изготовление опытных образцов вакцины
2.2.6. Определение физических и иммунобиологических свойств опытных образцов вакцины
2.2.7. Статистическая обработка результатов
3. Результаты собственных исследований
3.1. Основные биологические свойства контрольно - производственных
штаммов пастерелл
3.2. Подбор режима глубинного культивирования пастерелл

3.3. Изучение инактивации Р.тикоаба и РЛшепкйуйса
аминоэтилэтиленимином и формалином
3.4. Изготовление опытных образцов вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней и изучение их физических и иммунобиологических свойств
3.4.1. Физические свойства опытных образцов вакцины
3.4.2. Иммунобиологические свойства опытных образцов вакцины
3.4.2.1. Безвредность
3.4.2.2. Реактогенность
3.4.2.3. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
лабораторных животных
3.4.2.4. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
овцах
3.4.2.5. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
свиньях
3.4.2.6. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на крупном рогатом скоте
3.5. Изготовление экспериментальных серий вакцины против пастереллёза
рогатого скота, лошадей и свиней инактивированной эмульсионной
3.6. Контроль качества вакцины
3.6.1. Определение основных физических и иммунобиологических свойств
экспериментальных серий вакцины
3.7. Определение активности антигенов Р.тпЙосЮа и Р.ЬаепнйуОса в составе вакцины в процессе её хранения
3.8. Изучение эффективности применения вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней в условиях
хозяйств
4. Обсуждение результатов исследований
5. Выводы
6. Практические предложения
7. Список использованной литературы
Приложения

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ФГУ - федеральное государственное учреждение
‘РА - формальдегид КС - клеточная стенка
ВГНКИ - Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
ВНИИЗЖ - Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных
N - количество микробных клеток К - константа скорости инактивации
К50 - концентрация инактиванта обеспечивающая гибель 50 % клеток в
микробнсщ популяции
^ - логарифм с основанием
лог2 - логарифм с основанием
лог3 - логарифм с основанием
КОЕ - колониеобразующая единица
МПБ — мясо-пептоннный бульон
МПА - мясо-пептонный агар
ИД5() - пятидесятипроцентная инфицирующая доза ИмДл, - пятидесятипроцентная иммунизирующая доза ИФА - иммуноферментный анализ ЛД5о - пятидесятипроцентная летальная доза

Быстрее всего (7 - 14 сут) этот процесс происходил при температуре хранения 37°С, при хранении образцов при температуре 2 - 8°С через 1-3 мес.
3.4.2. Иммунобиологические свойства опытных образцов вакцины
Из иммунобиологических свойств опытных образцов вакцины против пастереллеза рогатого скота, лашадей и свиней необходимо было изучить безвредность, реактогенность, антигенные и иммуногенные свойства.
3.4.2,1. Безвредность
Изучение безвредности опытных образцов вакцины начато с экспериментов по оценке токсичности биомассы пастерелл, инактивированной аминоэтилэтиленимином. Для этого культуру пастерелл вначале осадили на центрифуге при 5тыс. об/мин в течение 20 мин, а затем осадок ресуспендировали в 0,9% - ном забуференном растворе хлорида натрия до концентрации 1,2хЮ10 микробных клеток в 1 см3.
Токсичность каждого образца инактивированной биомассы определяли на 10 белых мышах массой 16-18 г, путем подкожной инъекции суспензии в объеме 0,5 см3 с концентрацией микробных клеток 6 и 3 млрд./см3.
Учет результатов проводили через 1, 2 и 10 сут. В течение всего срока наблюдения мыши оставались живы.
При проверке безвредности вакцины использовали белых мышей массой 16-18 г. из расчета 10 голов на образец вакцины. Препарат вводили подкожно, в области спины в объеме 0,5 см3. В течение 10 сут наблюдения животные оставались живыми и клинически здоровыми.
При проверке безвредности на кроликах использовали 6 животных массой 1,5-2,0 кг, которым вакцину вводили в объеме 0,5 и 1,0 см3 с общей концентрацией 10 млрд. м.к./см3 пастерелл, животные оставались клинически здоровыми в течение 21 сут (срок наблюдения). Однако у некоторых животных наблюдалась местная реакция, которая зависела от объема вводимой вакцины и содержания в ней антигена. На 6-7 день после инъекции у 3 животных, которым