Роль индукторов цитохрома Р-450 в регуляции активности белков детоксикации ксенобиотиков и пролиферации клеток гепатом

• Автор: Гужаева, Екатерина Львовна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1.ВВЕДЕНИЕ
П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ферменты I и II фазы метаболизма: структура, функция регуляция
1.1 Место и роль цитохрома Р-450 в организме
1.2 Индукция ферментов I фазы метаболизма
ксенобиотиков
1.2.1 Фенобарбитальный тип индукции
1.2.2 Индукторы нролифераторов пероксисом
1.2.3 Метилхолантреновый тип индукции
1.3 Индукция ферментов II фазы метаболизма ксенобиотиков
1.4 Клеточные линии с нарушениями в передаче индукционного сигнала
2. Цитохром Р-450 и Р-гликопротеин как компоненты системы МЛУ
2.1 Р-гликопротеин-опосредованная МЛУ
2.2 Координированное функционирование
изоформцитохрома Р-450 и Р-гликопротеина
3. Влияние индукторов цитохрома Р-450 на пролиферацию клеток
3.1 Митогенное действие активных форм кислорода
3.2 Взаимодействие лиганда с АЬ рецептором
возможный механизм клеточной пролиферации
3.3 Физиологическая роль АЬ рецептора в организме
3.4 ' Фосфатидилинозитол-3-киназа и ее роль в
пролиферативном ответе клетки
III.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Характеристика используемых клеточных линий
2. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков
3. Биохимические методы исследования
3.1 Определение активности бензапиренгидроксилазы
3.2 Определение активности 7 этокеирезору-финдэетилазы
3.3 Определение НАДФ(Н)-хиноноксидоредуктазы
3.4 Определение концентрации белка
4. Измерение активности Р-гликопротеина
5. МТТ-тест
6. Оценка пролиферативного действия индукторбв
цитохрома Р
6.1 Изучение мигогенного действия индукторов по
включению 3Н тимидина
6.2 Определение скорости размножения клеточных
культур по приросту количества клеток
6.3. Подсчет количества митозов
7. Определение уровня обмена фосфолипидов по включению 32Р
8. Определение количества фосфатидилинозитол
киназы
9. Оценка экспрессии изоформ цитохрома Р-450 с помощью моноклональных антител
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Выбор моделей и условий эксперимента. Изучение функционирования ферментов I фазы метаболизма ксенобиотиков
2. Изучение функционирования ферментов II фазы метаболизма ксенобиотиков
3. Изучение способности к индукции цитохрома Р-450 в сублиниях гепатомы МсА КН 7777 с различной степенью устойчивости к колхицину. Колхицин как индуктор изоформ цитохрома Р
4. Действие индукторов цитохрома Р-450 ка клеточную пролиферацию
5. Влияние индукторов цитохрома Р-450 на обмен фосфолипидов и уровень фосфатидилинозитол-3-киназы
6. Влияние индукторов цитохрома Р-450 на активность Р-гликопротеина в клетках гепатомы
V. ОБСУЖДЕНИЕ
VI. ВЫВОДЫ
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

способный взаимодействовать с G-белками и фосфоинозитидами. PKB/Akt активируется большим количеством факторов роста: PDGF, EGF, NGF и др. Показано, что вортманин ингибирут эту активацию (57). Также было показано, что PDGF рецептор с мутациями по Туг 740 и Туг 751, который не может связываться с SH2 доменом РБК, не стимулирует активность PKB/Akt (74). Исследованиями in vitro было показано, что если инкубировать совместно фосфоинозитиды, продукты фосфорилирования РБК и PKB/Akt, происходит связывание в PH домене (39). Таким образом, к настоящему времени накопилось довольно большое количество работ, дающих представление о механизмах процесса активации PKB/Akt через РБК. Схематически этот процесс можно представить так: Р85 РБК фосфорилируется по остатку тирозина в ответ на введение факторов роста; pi 10 активируется одновременным взаимодействием с р85 и активированным RAS (находящимся в GTP-связывающем состоянии); активация РБК приводит к увеличению количества фосфоинозитидов,которые связываются с плекстрин-гомологичным доменом PKB/Akt что стимулирует его киназную активность (рис.4.).
Таким образом, из анализа литературы видно, что эффекты индукторов цитохрома Р-450 на функции клеток не ограничиваются способностью индуцировать ферменты метаболизма ксенобиотиков, а вызывают и другие изменения в функционировании клетки. Поэтому в своей работе мы хотели исследовать эти эффекты индукторов цитохрома Р-450 и выяснить, связанны ли они с индукцией и функционированием самого фермента.