Особенности протеолитического процессинга и субъединичной структуры адгезионного G-белоксопряженного рецептора CIRL

• Автор: Серова, Оксана Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Общая характеристика адгезионных Б-белоксопряженных рецепторов
1.1. Рецепторы иммунной системы
1.2. Кальций-независимые рецепторы латротоксина СІШ
1.3. Рецепторы СЕРБЯ/Пато
1.4. Рецепторы ВАІ
1.5 Другие адгезионные рецепторы
2. Особенности субъединичной структуры адгезионных бРСБ
2.1. Протеолитический процессинг адгезионных БРСИ в СРБ-домене
2.2. Дополнительный протеолитический процессинг адгезионных ЄРСИ,
растворимые фрагменты рецепторов
2.3. СРБ-подобные домены в других рецепторах
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Особенности субъединичной структуры рецептора СІМА
1.1. Диссоциация субъединиц рецептора СІШЛ
1.2 Комплекс субъединиц р120/р85 СІШЛ на поверхности клеточной
мембраны
1.3 Модель биосинтеза СІШЛ
2. Идентификация белков в составе комплексов с рецептором СІМ1 „54

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Материалы
1.1. Реактивы
1.2 Штаммы E
1.3. Плазмидные конструкции
1.4. Антитела
1.5. Растворы
1.6. Культуральные среды
2. Методы
2.1. Процедуры, использованные при работе с бактериальными клетками
2.2 Методы, использованные при работе с ДНК
2.3. Общие процедуры, использованные при работе с белками
2.4. Процедуры, использованные при работе с эукариотическими
клетками
2.5. Получение антител к р85-субъединице CIRL1 и приготовление
иммуноаффинного сорбента
2.6. Аффинная хроматография
3. Оборудование
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Передача сигнала в клетке - это часть сложной системы коммуникации, которая управляет основными клеточными процессами и координирует действия клетки. Возможность клеток корректно отвечать на изменения окружающей их среды является основой развития, репарации тканей, иммунитета и системы поддержания гомеостаза в целом. Способность клеток воспринимать внешние сигналы определяется специальным классом белковых молекул - рецепторами. Большое разнообразие типов и подтипов рецепторов обеспечивает широкий динамический диапазон физиологических ответов и высокую информационную емкость путей, передающих сигналы.
G-белоксопряженные рецепторы [G protein-coupled receptors, GPCRs] представляют одно из самых больших и наиболее разнообразных семейств трансмембранных белков, кодируемых геномом многоклеточных животных. Так у человека обнаружено более 800 различных генов, кодирующих G-белоксопряженные рецепторы, среди которых выделяют пять семейств (глутаматные, родопсиновые, адгезионные, Frizzled/taste2 и секретиновые). GPCRs участвуют в передаче сигналов внутрь клетки в ответ на воздействие разнообразных внеклеточных стимулов, включающих физические стимулы (свет, запахи, тепло], химические сигналы в виде ионов (Са2+, Н+],
нейромедиаторов (дофамин, норадреналин, адреналин, ацетилхолин, нуклеотиды], пептидов и белковых гормонов (хемокины или опиаты], липидов и эйкозаноидов (сфинголипиды или лейкотриены].
GPCRs опосредуют большое количество физиологических процессов в
эукариотических организмах, нарушение работы этих рецепторов приводит к
возникновению множества различных заболеваний. Около 40 %
фармацевтических препаратов, выпускаемых на рынке, использует в качестве

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Особенности субъединичной структуры рецептора СИПЛ
СИЛЫ принадлежит к семейству адгезионных С-белоксопряженных рецепторов. Данные рецепторы являются природными гибридами двух классов белков - сигнальных рецепторов и молекул клеточной адгезии. Подобно другим членам семейства СШЫ состоит из двух субъединиц -внеклеточной гидрофильной субъединицы р120, содержащей модули клеточной адгезии, и трансмембранной субъединицы р85, участвующей в передаче сигнала [рис. 4).
CIRL1
внешняя х—1 внутренняя

Рис, 4. Схематичное изображение белка CIRL1. Здесь и далее ПМ - плазматическая мембрана.
Двухсубъединичная структура является результатом протеолитического расщепления молекулы предшественника. Установлено, что сайт протеолиза располагается внутри консервативного домена, в непосредственной близости от первого трансмембранного сегмента. Этот домен получил название GPS (G protein-coupled receptor Proteolysis Site) и был обнаружен у всех гомологичных адгезионных G-белоксопряженных рецепторов, за исключением GPR123. Сайт протеолиза является высоко консервативным: в положении Р 2 остаток His, в положении Р 1 остаток Leu, в положении Р+1 - либо Ser, либо Thr. Кроме этого GPS-домен содержит четыре консервативных остатка Cys и два Тгр. На данный