Альбумины семян льна: биохимические и физико-химические свойства

• Автор: Козловская, Юлия Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Тверь
• Количество страниц: 122 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ЕЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Аминокислотный состав альбуминовых белков
1.2. Структурная организация белков
1.3. Альбумины животного и растительного происхождения
1.4. Выделение белков растительного происхождения
1.5. Методы количественного определения
индивидуальных белков
1.6. Кислотно-основные свойства альбуминовых белков
1.7. Электрохимические свойства белков и их электрофоретическое поведение
1.8. Поверхностное натяжение и поверхностно-активные
вещества
1.9. Адсорбция и структурообразование адсорбционных слоев
белков
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Выделение и очистка белков
2.2.1. Гомогенизация биоматериала (семян льна)
2.2.2. Выделение и очистка белков альбуминов
из гомогената семян и стеблей льна
2.3. Приготовление реактивов
2.3.1. Приготовление трис-глицинового буфера
2.3.2. Приготовление 50% и 100% насыщения
нейтрального раствора сульфата аммония (NH4)2S04

2.3.3. Приготовление биуретового реактива
2.4. Спектрофотометрический метод качественного
и количественного анализа водных растворов белков
2.5. Биуретовый метод определения концентрации белков
2.6. Методика электрофореза на целлогеле в
горизонтальных блоках
2.6.1. Подготовка к работе полосок целлогеля
2.6.2. Подготовка к работе ЭФ камеры
2.6.3. Нанесение образцов
2.6.4. Окрашивание белковых фракций
2.6.5. Просветление целлогеля
2.6.6. Сканирование проб
2.7. Методика электрофореза на агарозе
2.8. Метод электрофореза в полиакриламидном геле
2.9. Метод максимального давления пузырька
2.10. Метод электронной микроскопии
2.11. Линейный регрессионный анализ
2.12. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖЕНИЕ
3.1. Изучение электрофоретического поведения альбуминов, выделенных из стеблей и семян льна
3.2. Выделение и очистка белков альбуминов из семян
растений льна
3.3. Определение концентрации белков альбуминов в
водных экстрактах методом УФ-спектроскопии
3.4. Определение содержания белков альбуминов
в семенах льна методом биуретовой реакции
3.4.1. Построение калибровочного графика

3.4.2. Количественное определение содержания белков
альбуминов в семенах льна
3.5. Определение гетерогенности альбуминов семян
льна методом электрофореза на агарозе
3.6. Определение молекулярной массы альбуминов
семян льна
3.7. Изучение поверхностной активности раствора альбуминовых белков
3.8. Предполагаемые модели структуры адсорбционных слоев альбуминов льна
3.9. Электронномикроскопическое исследование структуры межфазного адсорбционного слоя альбуминов
льна, сформированного на границе с воздухом
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

фракционирования, если выделяемый белок находится в осадке, и повышается его выход - если он находится в растворе [3, 11].
Фракционирование белков ведут разными способами:
использованием солей органических растворителей, электрофоретически, методом молекулярных сит и др.
Метод фракционирования белков солевыми растворами основан на том, что каждый индивидуальный белок разделяемой смеси осаждается из нее при определенной концентрации той или иной соли. Например, глобулины выпадают в осадок при 50% насыщения нейтрального раствора сульфата аммония, а альбумины - при 100% насыщения нейтрального раствора (ЫН4)2 804). Процесс осаждение белка из раствора под действием соли называют высаливанием. Для фракционирования белков широко применяют водные растворы метилового и этилового спирта, ацетон и другие органические растворители.
Метод электрофореза, используемый для фракционирования, основан на способности различных белков с разной скоростью перемещаться в растворе, по влажной фильтровальной бумаге или в другой твердой среде (крахмале, агарозе, полиакриламиде) под действием постоянного электрического тока. Скорость передвижения белковых молекул определенного вида к аноду или к катоду зависит их электрического заряда, молекулярной массы и формы, ионной силы, показателя pH и состава буферного раствора, а также приложенного потенциала.
Метод электрофореза в ПААГ в различных модификациях в настоящее время стал неотъемлемой частью фундаментальных и прикладных исследовательских работ в области молекулярной и клеточной биологии, биохимии и биофизики. Данный метод пригоден для препаративного и аналитического разделения пептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот, гормонов, надмолекулярных комплексов (мембран, рибосом и др.).