Разработка научно-методических основ и биотестсистем для скрининга иммуносупрессоров

• Автор: Салова, Татьяна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 175 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

I. ВВЕДЕНИЕ
П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Вторичные метаболиты микроорганизмов. Новые аспекты их использования и проблемы скрининга
1.1. К истории открытия циклоспорина А
1.2. Продуценты циклоспоринов
1.3. Химия циклоспорина А
1.4. Биосинтез циклоспорина А. Циклоспорин син-тетаза
1.5. Направленный биосинтез циклоспорина А
1.6. Эффекты циклоспорина А на уровне клеток и межклеточных взаимодействий
1.7. Новые иммуносупрессоры природного проис-
хождения
1.8. Внутриклеточные мишени циклоспорина А, ГК506
и рапамицина
1.9 Некоторые проблемы моделирования при поиске
природных иммуносупрессоров
1.10 Биологическая активность циклоспориновых
структур, не связанная с иммуносупрессорным
эффектом
Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Материалы и методы
1.1 Антибиотики и реагенты
1.2 Тест-объекты (виды и штаммы грибов)
1.3 Питательные среды

1.4 Определение антифунгальной активности циклоспорина А одного и в комбинации с другими биологически
1.5 Изучение морфологических особенностей мицелия в присутствии циклоспорина А
1.6 Ультраструктурный анализ действия циклоспорина А на клетки грибов
1.7. Получение липосомальных препаратов антибиотиков
1.8 Получение протопластов из клеток Tolypocladium inflation subsp. blastosporum
1.9 Определение нарушения проницаемости цитоплазматической мембраны
1.10 Определение белка и нуклеиновых кислот в клетках
грибов
1.11 Определение активности протеолитических ферментов
1.12 Математическая обработка результатов
Глава 2. Особенности действия циклоспорина А на грибы
2.1. Антифунгальная активность циклоспорина А и его влияние на морфологические свойства
при росте Aspergillus niger 137 а в различных условиях культивировании
2.2. Морфологические особенности культуры Aspergillus niger 137 а щт росте на агаризованных средах
содержащих циклоспорин А

2.3. Морфология клеток Aspergillus niger 137а, растущих в присутствии циклоспорина А
в условиях глубинного культивирования
2.4. Влияние циклоспорина А на морфологические свойства Pénicillium lucidum штамм 41 В
2.5. Морфологические аномалии Aspergillus niger и Tolypocladium inflalum, вызываемые новыми природными иммуносупрессорами
Глава 3. Влияние некоторых биологически активных соединений на антифунгальную активность циклоспорина А
3.1 Влияние макролидных структур на антифунгальный
эффект циклоспорина А
3.2. Влияние некоторых новых иммуносупрессоров на
антифунгальный эффект циклоспорина А
3.3 Влияние на активность циклоспорина А фузидина и
аминогликозидных антибиотиков
3.4. Влияние на активность циклоспорина А соедине ний, включенных в биоэнергетический метаболизм
Глава 4. Изучение действия циклоспорина А на клетки
Aspergillus niger методом электронной микроскопии
Глава 5. Действие циклоспорина А на барьерные функции цитоплазматической мембраны Aspergillus
niger 137 а
5.1. Действие циклоспорина на синтез белка и
нуклеиновых кислот

ристоилирования не ясна. Проверяются предположения, что оно необходимо ДЛЯ аССОЩааЦИИ КаЛЬЦИНСЙрИНа С МембраНОй, ДЛЯ ПОДЦбрЖаНИЯ структуры тримера и т.д. (210).
Субъединица В хелатирует С а . Кальций связывается также с кальмодулином. Недавно с помощью ЯМР обнаружено сходство вторичной структуры, субъединицы В и кальмодулина. Однако эти белки друг друга заменить не могут. Кроме того Са2 при связывании с каждым белком по-разному влияет на активность кальцийнейрина.
Калыщйнейрин высококонсервативен и играет ключевую роль в биологических ответах клетки на разные внешние воздействия. На биохимическом уровне он, в частности, включен в регуляцию функционирования Са АТФазьг у дрожжей, ренальной К+Ыа АТФазы - у млекопитающих, калиевых каналов - у растений, М-метил-О-аспартатных каналов у УепвЬги1и и т.д. (210). На физиологическом уровне - кальциинеирин необходим для адаптации грибов к стрессовым условиям, ответу на феромоны; кальцийнейрин участвует в путях передачи сигналов в нервной ткани и т.п.
Функции кальцнинеирина в норме связаны с его реагированием с иммунофилинами. Реагирование же кальцийнейрина с комплексом «иммунофилин-иммуносупрессор», продемонстрированное различными методами - от использования целенаправленно полученных мутантов до фотоаффинной метки, показало исключительно многообразные нарушения метаболизма самых разных клеток. Этот факт находит отражение в быстро растущей литературе, посвященной как различным аспектам биологической активности циклоспорина и близких к нему по механизму действия иммуносупрессоров, так и проблемам их токсичности. В то же время должно быть отмечено, что инактивация кальцийнейрина комплексом «иммунофилнн-иммуноеупреесор», во-первых, не является необратимой, что важно