Регуляция аденилатциклазы сердца кролика кальмодулином и регуляторным компонентом, связывающим гуаниловые нуклеотиды

• Автор: Панченко, Михаил Павлович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 186 c. : ил

Список сокращений
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. Регуляция аденилатциклазы клеток эукариот гуани-ловыми нуклеотидами
1.1. ГТФ-зависимая активация аденилатциклазы гормонами. Гормонстимулируемый регуляторный ГТФ-азный цикл
1.2. Белковые компоненты гормонстимулируемого аденилат-циклазного комплекса
1.2.1. Гормональный рецептор
1.2.2. Регуляторный компонент, опосредующий ГТШ-зависимую активацию аденилатциклазы гормоном
1.2.3. Каталитический компонент аденилатциклазного ком-

плекса
1.3. Лигандзависимые взаимодействия между компонентами аденилатциклазного комплекса. Модель активации аденилатциклазы гормонами и гуаниловыми нуклеотидами
Глава 2. Регуляция аденилатциклазы ионами кальция. Участие кальмодулина в проявлении Са^+-зависимой активации
фермента
Глава 3. Аденилатциклаза сердца
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Выделение препарата наружных плазматических мембран (легкой сарколеммы) из сердца кролика
1.2. Солюбилизация и хроматография регуляторного и каталитического компонентов аденилатциклазы сердца
1.3. Выделение кальмодулина из головного мозга быка

1.4. Выделение препарата плазматических мембран из
стриарной системы головного мозга кролика
1.5. Выделение препарата плазматических мембран из тромбоцитов человека
1.6. Определение активности аденилатциклазы
1.7. Электрофорез в полиакриламидном геле
1.8. Расчет концентрации свободного Са2+
1.9. Определение концентрации белка
1.10. Использованные реактивы
2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика свойств аденилатциклазы в препарате
легкой сарколеммы из сердца кролика
2.2. Регуляция аденилатциклазы в препарате легкой сарколеммы ионами кальция. Участие кальмодулина в проявлении активирующего влияния Са^+ на активность фермента
2.3. Солюбилизация, разделение и реконструкция каталитического компонента и ыз-белка аденилатциклазного комплекса сердца. Проявление кальмодулинзависимой регуляции на реконструированном комплексе:.-белок-каталитический компонент
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

АТ©
АМ©
цАМФ

гд©
Єрр.(сн2)р Єрр.(ш ,)р ГТФ^ Б ГД©^> з НАД+
ГТ©-
сефароза
ДЭАЭсефароза
кмсефароза
ГЮИцеллюлоза
трис

АКТГ
ЭДТА
ЭГТА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
- аденозин-5’-трифосфат
- аденозин-5’-монофосфат
- циклический аденозин-З’:5’-монофосфат
- гуанозин-5’-трифосфат
- гуанозин-5’-дифосфат
- гуанозин-5 ’ -(^,^-метилен.)-трифосфат
- гуанозин-5 ’ -.(^3 ,^-имидо.)-трифосфат
- гуанозин-5»-(к-тио)-трифосфат
- гуанозин-5’-(^-тио)-дифосфат
- никотинамидадениндинуклеотид
- пирофосфат неорганический
- фосфат неорганический
- сефароза с иммобилизованным по ^-фосфату
- диэтиламиноэтилсефароза
- сефароза с иммобилизованным калъмодулином
полиэтилениминоцеллюлоза трис-..(гидроксиметил.)аминометан дитиотрейтол
адренокортикотропный гормон этилендиаминтетраацетат этиленгликольбис(^-аминоэтил)-ацетат
ГТ©
-тетра-

аминокислотных последовательностей, формирующих лигандсвязываю-щий участок этих классов рецепторов /308/.
Несмотря на разную фармакологическую специфичность f 1 и ß 2 классов адренергических рецепторов, лигандсвязывающие полипептиды обоих классов рецепторов обладают одинаковой молекулярной массой равной 62000 Д /308/. Связывание гормонов с рецепторами носит ГТФ-зависимый характер: в присутствии ГТФ (или Cpp(NH)p) сродство ^ -адренергических,Н^-гистаминовых и мускариновых хо-линергических рецепторов,соотвественно,к катехоламинам /117, 253/, гистамину /146/ и оксотреморину /22, 95, 117, 260, 325/ понижается, тогда как гуаниловые нуклеотиды не изменяют сродства этих рецепторов к соответствующим антагонистам /117, 146,
260, 323, 325/. В свою очередь изменение активности АЦ сердца под действием гормонов (активация катехоламинами /117/, глюка-гоном /93/, гистамином /40/ и ингибирование мускариновыми холи-ноергиками /117, 143, 146/)также происходит лишь в присутствии ГТФ или Gppfe )р.ГТФ-зависимые активация и ингибирование АЦ сердца гормонами осуществляются в результате функционального сопряжения каталитического компонента фермента соответственно с ГТФ-конформациями ы3-белка и Ni-белка. О разной природе нукле-отидсвязывающих компонентов АЦ сердца свидетельствуют, в частности, данные о способности низких концентраций N-этилмалеимида или токсина ИЗ Bordetella pertussis избирательно устранять ИН-гибирование АЦ сердца агонистами мускариновых холинергических рецепторов, сохраняя при этом ГТФ-зависимую активацию фермента агонистами ß -адренергических рецепторов, а также гистамином и глюкагоном /117, 118/. Следует отметить, что избирательная инактивация Ni -белка под действием N -этилмалеимида вызывает также переход всех мускариновых холинергических рецепторов сарколеммы сердца в низкоаффинное, ГТФ-нечувствительное состояние, тог-