Микробиологический анализ на основе мономолекулярных пленок антител и сканирующей зондовой микроскопии

• Автор: Будашов, Игорь Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 166 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л Атомно-силовая микроскопия (АСМ)
1ЛЛ АСМ-исследование микробиологических объектов
1ЛЛЛ Бактерии и клеточные структуры бактерий
1ЛЛ.2 Вирусы
1ЛЛ.З Другие клетки и клеточные структуры
1 Л.2 Техника подготовки образцов для АСМ
1Л.2Л Иммобилизация и подготовка объектов для АСМ
1Л.2.2 Модификация игл
1Л.З АСМ-исследование различных свойств микробиологических объектов (механических, иммунных, биохимических, меж- и внутримолекулярных сил)
1Л.4 Манипулирование микрообъектами с помощью зонда
1.2 Ленгмюровская технология
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Использованные материалы
2.2 Методы исследования
2.2.1 Формирование и перенесение ленгмюровских пленок
2.2.1.1 Формирование и перенесение ленгмюровских пленок амфи-фильных полиэлектролигов (АПЭ)
2.2.1.2 Формирование и перенесение ленгмюровских пленок АТ без АПЭ
2.2.1.3 Формирование и перенесение ленгмюровских пленок АТ с АПЭ
2.2.2 Простая адсорбция АТ
2.2.3 Снятие тс-А изотерм
2.2.4 Измерение иммунологической активности АТ (ИФА)
2.2.5 Изотермы адсорбции
2.2.6 Адсорбция микроорганизмов
2.2.6.1 Простая
2.2.6.2 Иммуноадсорбция
2.2.7 Гравиметрический анализ на основе кварцевых пьезоэлектрических резонаторов
2.2.8 Атомно-силовая микроскопия (АСМ) 76 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Ленгмюровские пленки АПЭ
3.2 Ленгмюровские пленки чистых АТ и АТ с АПЭ
3.3 АСМ-анализ микробиологических объектов
3.3.1 АСМ-анализ микробиологических объектов, неспецифически адсорбированных на подложки
3.3.2 АСМ-анализ риккетсий и бактерий, специфически адсорбированных на подложки
3.3.3 АСМ-анализ вирусов, специфически адсорбированных на подложки, и программа анализа изображений
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

больших прижимающих силах (>10 нН) сканирование приводило к активации тромбоцитов. Активированная ламеллоподия содержит гранулы, которые выглядят, как яркие пятна на высотном изображении, и как мягкие структуры на амплитудном изображении при использовании метода силовой модуляции. Волокнистые структуры выглядели выпуклыми на высотном изображении и жесткими — на амплитудном. Был проведен анализ локального состава цитоскелета путем изучения последовательных этапов деградации определенных волокон при добавлении специфического реагента — цитохалазина В, что доказывало актиновую природу филаментов.
Каётасйег с сотр. [45] измерили силовые кривые как функцию латеральной позиции на верхней поверхности человеческих тромбоцитов. Эти кривые показывают, как сдавливается клетка при нагрузке зондом. Средние силовые кривые (усредненные из двух кривых: подвода и отвода) не зависели от скорости сканирования (в диапазоне 0,2-20 Гц). Т.е. силовые кривые тромбоцита главным образом упругие, без вязкости (это для тела клетки, а для филлоподий и упругости почти нет). Сканирование по одной линии с силовыми кривыми в каждой точке дает трехмерный график для данной прижимающей силы. При увеличении этой силы уменьшалась ширина клетки. Это говорит о том, что часть клетки сжималась так сильно, что ее высота была неотличима от субстрата. Причем повторяемость процесса говорит о его обратимости. Анализ силовых кривых позволил определить коэффициенты упругости тромбоцита с латеральным разрешением около 100 нм и привести карту распределения этих