Усиленный атерогенный эффект макрофагов из моноцитов крови больных ИБС, выявленный в аэробных условиях и при аноксии in vitro

• Автор: Хильченко, Алексей Валериевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 87 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ:
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Происхождение и функции макрофагов
1.2. Механизмы предактивации и активации МФ
1.3. Взаимодействие МФ и окисленных ЛНГ1 in vivo
1.4. Метаболизм ЛНП липидов и холестерина в макрофагах
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Использованные материалы
2.2. Растворы и среды
2.3. Клеточная модель
2.4 Выделение ЛНП из плазмы крови человека
2.5. Модель моноцит/макрофаг зависимого окисления ЛНП
2.6. Оценка окислительной модификации ЛНПн и ЛНПг
2.7. Измерение числа жизнеспособных моноцитов/макрофагов
2.8. Захват моноцитами/макрофагами ЛНП
2.9. Метод статистического анализа
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. ИЗУЧЕНИЕ СПОСОБНОСТИ МФН, ОКИСЛЯТЬ И ПОГЛОЩАТЬ ЛНПн, И ЛНПГ В АЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ И В УСЛОВИЯХ АНОКСИИ IN VITRO
3.2. Разработка метода предактивации и активации МФн с помощью ФНО-а, и сравнение их
СПОСОБНОСТИ ОКИСЛЯТЬ ЛНП1 UN VITRO
3.3. Изучение способности МФибс, окислять и поглощать ЛНПн и ЛНП,- в аэробных условиях и в УСЛОВИЯХ АНОКСИИ IN VITRO
3.4. Сравнение и обсуждение способнос ти МФп и МФИбс окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПг в
АЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ И УСЛОВИЯХ АНОКСИИ
ВЫВОДЫ
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

Список сокращений:
МФ - Макрофаги
ЛНП - Липопротеины низкой плотности
ЛНПн - ЛНП, полученные из крови здоровых доноров
ЛНПг - ЛНП, полученные из крови больных с гиперхолестеринемией
ФНО-а - Фактор некроза опухоли альфа
ПОЛ - Перекисное окисление липидов
МФиБС - МФ, полученные из моноцитов крови больных с ишемической
болезнью сердца
МФн - МФ, полученные из моноцитов крови здоровых доноров
ИБС - Ишемическая болезнь сердца
АФК - Активные формы кислорода
МДА - Малоновый диальдегид
ТБК-РП - ТБК реактивные продукты (продукты, реагирующие с
тиобарбитуровой кислотой)
ОХ - Общий холестерин
ЭФП - Электрофоретическая подвижность
ГМФШ - Г ексозомонофосфатный шунт
SSC - Surface-connected compartments
окЛНП - Окисленные ЛНП
ЭК - Эндотелиальные клетки
ИЛ-1 - Интерлекин
ИЛ-6 - Интерлекин
ФЛ - Фосфолипаза
1Р2 - Инозитолбифосфаг
1Р3 - Инозитолтрифосфат
ДАГ - Диацилглицерол

В последние десятилетия одной из главных причин заболеваемости и смертности населения является возникновение и/или прогрессирование атеросклероза. Хотя в течение последних десяти лет было предложено несколько гипотез развития атеросклероза, ни одна из них не может полностью объяснить процесс патогенеза атеросклероза в целом, так как развитие атеросклероза связано с многочисленными факторами «риска».
Несмотря на это,” в настоящее время хорошо известно, что клеточным элементам сосудистой стенки, а также циркулирующим моноцитам/макрофагам принадлежит существенная роль в патогенезе атеросклероза [40, 64].
Этому способствуют факторы «риска», к которым принадлежат гипертония, курение, стресс и другие факторы [123, 132]. Факгоры «риска» сопровождаются генерализованной, а также локальной ишемии сосудистой стенки [57, 137], что ведет к выделению эндотелиальными клетками (ЭК), макрофагами (МФ), гладкомышечными и другими клетками активных форм кислорода (АФК), провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-6 и др.), участвующих в стимуляции макрофагов и их способности окислять ЛНП [18].
Окислительная способность макрофагов обусловлена стимуляцией их НАДФН-оксидазной и миелопероксидазной систем [6]. Имеются данные, согласно которым лишь стимулированные моноциты/макрофаги обладают способностью осуществлять свои многоплановые функции, в том числе выделять АФК, окислять и поглощать ЛНП [108].
В настоящее время установлено, что переход макрофагов из нестимулированного в стимулированное состояние проходит через стадию предстимуляции (прайминга), которая возникает при первичном воздействии стимула и заключается в повышении экспрессии и аффинности поверхностных скавенджер-рецепторов макрофагов, активизации ферментов ГМФШ, нарабатывание комплекса НАДФН-оксидазы [18].
Однако, в стимулированное состояние предстимулированные макрофаги переходят лишь после повторного стимула, при котором макрофаги уже становятся способными к продукции АФК, синтезу биологически активных

Макрофаги, не подвергнутые воздействию ФНО-а, также усиливали окисление ЛНП после 3-х часов их совместной инкубации (** - р<0,01), однако, этот эффект был значительно слабее, чем эффект стимулированных макрофагов.
Проведенная работа позволила также установить, что для предстимуляции и стимуляции макрофагов с помощью ФНО-а достаточны и оптимальны очень низкие концентрации ФНО-а (0,1-0,5 нг/мл), а также короткие сроки воздействия (10 мин):
Полученные данные позволяют предположить, что кратковременное воздействие низких доз ФНО-а на МФ не только в условиях in vitro, но и в условиях in vivo способно предстимулировать или стимулировать клетки, которые, затем способны более активно, чем нестимулированные макрофаги, окислять и поглощать ЛНП, способствуя началу образования атеросклеротических бляшек. Проверке данного предположения будут посвящены следующие разделы исследования.
3.3. Изучение способности МФибс» окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro.
Как было показано в разделе 3.1 макрофаги, полученные из моноцитов крови здоровых доноров, уже на первых часах ишемии активно окисляли и поглощали ЛНПн и, особенно, лнпп Кроме того в разделе 3.2. было показано, что предактивация и последующая активация моноцитов/макрофагов может происходить вследствие кратковременного (10 мин) двукратного воздействия очень низких концентраций ФНО-а (0,1+0,5 нг/мл).
Известно, что стимуляторами макрофагов наряду с цитокинами (ФНО-а, ИЛ -1,6 ) могут быть продукты ПОЛ и ряд других биологически активных соединений [6, 8, 10, 18, 42, 138]. Также известно, что ишемическая болезнь сердца (ИБС), как правило, сопровождается увеличением в крови больных продуктов ПОЛ [6, 13, 42,], ростом содержания провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а) [8, 79, 110, 115, 146, 156], ростом содержания в