Биохимические механизмы действия ганглиозидов как эндогенных адаптогенов в головном мозге крыс

• Автор: Захарова, Ирина Олеговна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 158 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений
Раздел 1. Введение
Раздел 2. Обзор литературы
2.1. Общие представления о строении, физико-химических свойствах и распространении
ганглиозидов
2.2. Функциональная роль ганглиозидов
2.3. Нейротрофический эффект ганглиозидов
2.3.1. Способность индивидуальных ганглиозидов при их системном введении нормализовать обмен и улучшать функциональное состояние животных
при поражении центральной нервной системы
2.3.2. Типы глутаматных рецепторов, способы передачи сигнала в клетку
2.3.3. Индивидуальные ганглиозиды повышают жизнеспособность нервных
клеток в культуре
2.4. Механизм защитного эффекта ганглиозидов при ишемии и действии неблагоприятных факторов среды
2.4.1. Активные формы кислорода и нейротоксичность. Механизмы регуляции свободнорадикальных реакций
2.4.2. Механизм защитного действия ганглиозидов против нейротоксического эффекта глутамата
2.4.3. Действие ганглиозидов на сайты связывания на плазматической мембране
и на ядра нервных клеток

2.4.4. Высвобождение ганглиозидов в межклеточное пространство в результате
шеддинга или разрушения мембран
2.5. Изменение содержания и молекулярной организации ганглиозидов мозга
при адаптации позвоночных к температуре обитания
2.5.1. Изменение содержания и состава углеводной компоненты ганглиозидов позвоночных при адаптации к холоду
2.5.2. Изменение содержания и состава гидрофобной компоненты ганглиозидов мозга позвоночных при адаптации к температуре обитания
Раздел 3. Материалы и методы исследования
3.1. Выделение индивидуальных ганглиозидов из мозга млекопитающих
3.1.1. Выделение суммарных ганглиозидов
3.1.2. Очистка суммарных ганглиозидов мозга млекопитающих
3.1.3. Выделение индивидуальных ганглиозидов на силикагеле методом колоночной хроматографии
3.1.3.1. Приготовление силикагеля для колоночной и тонкослойной хроматографии
3.1.3.2. Выделение индивидуальных ганглиозидов методом адсорбционной колоночной хроматографии
3.1.4. Определение чистоты выделенных препаратов индивидуальных ганглиозидов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии
3.2. Количественное определение содержания ганглиозидов с помощью резорцинового реагента
3.3. Анализ состава жирных кислот ганглиозидов методом газо-жидкостной

хроматограф ии
3.4. Выделение субклеточных фракций
3.4.1. Выделение субклеточных фракций методом дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы
3.4.2. Выделение синаптосомальной фракции из коры головного мозга крыс
3.5. Определение активности Ма+,К+-АТФазы в синаптосомах коры мозга крыс
3.6. Определение входа 45Са + в синаптосомы коры мозга крыс
3.7. Определение активности 14а+/Са2+-обменника
3.8. Определение количества восстановленного аскорбата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
3.9. Определение количества сульфгидрильных групп (-БН групп)
3.10. Оценка выживаемости клеток-зерен мозжечка
3.11. Определение количества белка
3.12. Экспериментальная адаптация крыс к холоду
Раздел 4. Результаты и обсуждение
4.1. Влияние ганглиозидов на жизнеспособность нервных клеток в культуре
4.1.1. Результаты исследований
4.1.1.1 .Влияние различных концентраций ганглиозидов на жизнеспособность
нейронов мозжечка крыс в культуре
4.1.1.2. Влияние различных концентраций ганглиозида вМ1 на жизнеспособность нейронов мозжечка крыс в культуре после индукции перекисного окисления липидов
4.1.2. Обсуждение результатов

поскольку вызывает активацию N0 синтазы, различных липаз (в частности, фосфолипазы Аг), протеинкиназ, эндонуклеаз и протеаз (Choi, 1992). Активация свободнорадикальных реакций имеет место на заключительных этапах. Однако в последние годы универсальность этой схемы вызывает сомнения. Так в ряде работ было показано, что генерация свободных радикалов имеет место уже в течение первых 2-3 минут после аппликации глутамата (Lafon-Cazal et al, 1993; Reynolds and Hastings, 1995). Это позволяет предположить, что генерация свободных радикалов может быть если не ранним, то, по крайней мере, основным звеном нейротоксичности, а не следствием заключительных этапов клеточной дегенерации.
В зависимости от того, какой атом в молекуле несет неспаренный электрон, свободные радикалы подразделяют на водород- (Н*), углерод- (СС13‘), сера- (GS*) и кислородцентрированные радикалы. Наибольшую опасность для клетки представляет последний тип радикалов, получивший название активные формы кислорода (Ог*', *0Н, липид-СЬ') и окись азота (NO*) (Halliwell, 1992; Coyle and Puttfarcken, 1993).
Основным источником супероксидного радикала (Ог*') может быть дыхательная цепь митохондрий и эндоплазматический ретикулум. Несмотря на то, что Ог*' обладает низкой реакционной способностью, супероксид способен инактивировать NADH дегидрогеназный комплекс электронной транспортной цепи митохондрий, а также вступать во взаимодействие с N0* с образованием пероксинитрита 0N00'. Этот нерадикальный продукт при распаде приводит к образованию гидроксильного радикала (*0Н), обладающего высокой токсичностью. Образование пероксинитрита способно приводить к разрушению белков и липидов (Lipton et al., 1993).
Гидроксильный радикал (*0Н) является также продуктом реакции Н2О2 с Fe2+, получившей название реакции Фентона: Fe2+ + НгОг -> Fe3+ + *0Н + ОН