Генетический полиморфизм ИЛ-13 и его рецептора у больных бронхиальной астмой

• Автор: Мазурина, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

Список сокращений.
ИЛ - интерлейкин
ИЛ4Яа - а-цепь рецептора к ИЛ
ИФН — интерферон
МкАТ - моноклональные антитела
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
РсеШ - высоко-аффинный рецептор к
1§ - иммуноглобулин
Іє - ген иммуноглобулина Е
ОЕТ - «стерильные» зародышевые транскрипты
ТЬ - Т-хелперы
Тге£ -регуляторные Т клетки
ТОРр - трансформирующий фактор роста р
ИР АТ - ядерный фактор - активатор транскрипции
ИР-кВ - ядерный фактор - активатор транскрипции каппа
8ИР - однонуклеотидные замены
8ТАТ6 - переносчик сигнала и активатор транскрипции

СОДЕРЖАНИЕ.
ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ
Цель исследования:
Задачи исследования:
Научная новизна и практическая значимость
Положения, выносимые на защиту:
ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Индукция синтеза IgE при бронхиальной астме
2.1.1. Механизм перестройки генов иммуноглобулинов на синтез IgE
2.1.2. Механизмы регуляции синтеза IgE in situ
2.1.3. Участие регуляторных Т-клеток в механизмах переключения изотипов
2.2. Аллергический фенотип при бронхиальной астме
2.2.1. Роль ИЛ-13 в регуляции эозинофильного воспаления
2.2.2. Роль ИЛ-13 в развитии субэпителиального фиброза
2.2.3. Роль ИЛ-13 в регуляции гиперпродукции слизи
2.2.4. Роль ИЛ-13 в развитии гиперреактивности бронхов
2.3. Генетический полиморфизм при бронхиальной астме
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Исследуемый материал
3.2. Реагенты и тест-системы
3.3. Методы исследования
3.3.1. Выделение ДНК
3.3.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

3.3.3. Определение полиморфизма методом ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов)
3.3.4. Определение полиморфизма масс-спектрометрическим методом
3.3.5. Твёрдофазый иммуноферменпгный анализ. (ELISА)
3.3.6. Оценка интерферонового статуса
3.3.7. Статистические методы
ГЛАВА 4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Характеристика групп больных бронхиальной астмой на
ОСНОВАНИИ КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
4.2. Исследование полиморфизма генов ИЛ-13 и ИЛ-4Ба
4.2.1. Ассоциация исследуемых SNP с заболеваемостью атопической бронхиальной астмой
4.2.2. Ассоциация генетического полиморфизма ИЛ-13 и ИЛ4Яа с повышенным содержанием обгцего IgE
4.2.3. Ассоциация генетического полиморфизма ИЛ-13 с повышенным содержанием сывороточного ИЛ
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ГЛАВА 6. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

•Агароза универсальная, агароза легкоплавкая, полиакриламид, бис-акриламид, этидиум-бромид, Трис НС1, ЕДТА, BSA, бромфеноловый-синий, ксиленцианол, минеральное масло, (фирма Serva, Германия).
3.3. Методы исследования.
Нуклеотидные последовательности исследуемых генов, были определены с помощью базы Database of Single Nucleotide Polymorphisms, release Sep. 12.2001. Аминокислотные последовательности выводили по известным нуклеотидным последовательностям с использованием программного продукта «Vector NTI® Suite v.6.0» (Informax, Inc). С использованием данной программы были также подобраны праймеры и эндонуклеазы рестрикции.
Гомологичная модель тройного комплекса ИЛ-13
рецепторами HH13Ral и HJI4Ral была построена с помощью программы SwissPdvViewer 3.7. В качестве матрицы была выбрана кристаллическая структура этого комплекса ЗВРО. Эта же программа была использована для моделирования мутагенеза молекулы ИЛ-13.. Анализ межмолекулярных интерфейсов и определение контактов для отдельных выбранных аминокислотных остатков проводили
помощью программы iMolTalk. Визуализацию белковых молекул осуществляли с помощью программы RasWin
3.3.1. Выделение ДНК.
Для выделения использовали набор «МИНИПРЕП» в
соответствии с инструкцией по применению. Суть метода заключается
в лизисе клеток крови с последующей сорбцией ДНК на сорбенте.
Смесь содержала 900 мкл лизирующего буфера, лейкоциты и 50 мкл