Модификация биохимических методов оценки содержания фосфорорганических соединений в пробах сложного состава

• Автор: Прокофьева, Дарья Станиславовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 124 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ
АСПЕКТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОС (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. АХЭ: СТРУКТУРА, ЛОКАЛИЗАЦИЯ, ФУНКЦИИ
1.2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ХОЛИНЭСТЕРАЗ
1.2.1. Биологический метод
1.2.2. Манометрический метод
1.2.3. Титриметрический метод (потенциометрическое титрование)
1.2.4. Электрометрический метод
1.2.5. Спектрофотометрические (колориметрические) методы,
основанные на использовании pH индикаторов
1.2.6. Спектрофотометрические (колориметрические) методы,
основанные на использовании специфических субстратов
1.2.7. Химический метод
1.2.8. Радиометрический метод
1.2.9. Обзор методов определения активности ХЭ: резюме
1.3. СОЗДАНИЕ ПЛАНШЕТНЫХ ВАРИАНТОВ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АХЭ
1.4. СОЗДАНИЕ ПЛАНШЕТНЫХ ВАРИАНТОВ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АХЭ, СОДЕРЖАЩЕЙСЯ
В ПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЕ КЛЕТОК
1.5. ВОЗМОЖНОСТЬ ЗАМЕНЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ КЛЕТОЧНЫМИ ЛИНИЯМИ
1.6. ИСТОРИЯ СОЗДАНИЯ ФОС И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
1.7. МЕХАНИЗМ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФОС С АХЭ

1.8. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ
КОЛИЧЕСТВ ФОБ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Планшетный вариант метода Эллмана
2.2 Планшетный вариант метода Хестрина
2.3 Исследование влияния примесей
2.4 Планшетный вариант метода Эллмана с использованием в качестве источника АХЭ клеточной линии человеческой нейробластомы
2.5. Оценка цитотоксичности с помощью определения содержания
АТФ в клетках нейробластомы БН-БУ5У
2.6. Комплексное исследование проб с объекта УХО
2.7 Анализ продуктов гидролиза Ю/Х методом ГХМС-ЭУ
2.7.1. Идентификация продуктов превращения БУХ избыточным количеством воды в кислой среде
2.7.2. Идентификация продуктов превращения ЛУХ эквимолярным количеством воды
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Химический анализ продуктов превращения ФОВ
3.2. Планшетные варианты биохимических методов
3.3. Изучение влияния продуктов гидролиза ФОВ на результаты биохимического анализа
3.4. Изучение влияния компонентов лакокрасочных покрытий на результаты биохимического анализа
3.5. Изучение влияния МЭА на результаты биохимического анализа
3.6. Изучение влияния перекиси водорода на результаты биохимического анализа
3.7. Изучение влияния меркаптанов на результаты биохимического анализа
3.8. Планшетный вариант метода Эллмана с использованием в качестве источника АХЭ клеточной линии человеческой нейробластомы

3.9. Комплексный анализ проб с объекта УХО
3.9.1. Биохимический анализ
3.9.2. Анализ проб на цитотоксичность
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК РАБОТ И ПУБЛИКАЦИЙ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

также для мониторинга уровней загрязнения рабочих поверхностей на предприятиях, так или иначе связанных с ФОВ. С появлением в конце прошлого века новой модификации спектрофотометров, способных измерять абсорбцию в лунках 96-луночных планшетов, а также многоканальных дозаторов переменного объема, стало возможным осуществлять определение активности ферментов планшетными модификациями биохимических методов, что позволило сократить количество используемого оборудования, реагентов и тестируемых проб, а также повысить производительность методов. Кроме того, планшетные модификации биохимических методов позволяют существенно повысить их метрологические характеристики. В 1983 году была разработана узкоспециализированная система планшетного анализа для измерения активности АХЭ методом Эллмана в пробах малого объема, представляющих собой элюатные фракции жидкостной хроматографии высокого давления [Brogdon et al., 1983]. Пять лет спустя, в 1987 году, группой ученых была опубликована работа по модификации метода Эллмана для планшетного анализа большого количества ограниченных по объему проб [Doctor et al., 1987]. Разработанная методика обладала быстротой и высокой чувствительностью. Hammond и Foster в 1989 году предприняли первую попытку перевести метод Эллмана на 96-луночный планшетный формат для оценки не только активности АХЭ, но также эффекта ингибирования активности фермента различными фосфорорганическими соединениями (ФОС) [Hammond, Forster, 1989]. Разработанная методика была опробована на пяти различных ФОС (зоман, табун, YX, параоксон, ДФФ) и показала отличную воспроизводимость и линейность для всех протестированных веществ. Однако из-за того что авторы работы преследовали цель снижения времени анализа, чувствительность методики была на порядок ниже по сравнению с традиционным методом Эллмана.
Планшетные варианты других методов определения активности ХЭ в доступной литературе не описаны.