Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов escherichia coli 0157 и их применение в диагностике

• Автор: Молофеева, Надежда Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 166 с. : ил.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Эпидемиология и эпизоотология заболеваний, вызываемых бактериями Е.соїі 0157
1.2. Резервуар и распространение инфекции
1.3. Патогенез
1.4. Лабораторная идентификация Е.соїі 0157
1.5. Устойчивость
1.6. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике
1.6.1.История открытия и области применения бактериофагов
1.6.2.Фагоидентификация бактерий и фаготипирование
1.6.3. Развитие фаговых корпускул в клетке хозяина
1.6.4. Реакция нарастания титра фага (РНФ)
11. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Сравнительная оценка используемых методов по изучению специфичности дифференциально-диагностических сред
2.2.2. Поиск бактериофагов Е.соїі 0157 и селекция клонов фагов
2.2.3. Характеристика фагов Е.соїі 0157
2.3. Разработка метода выделения и ускоренной идентификации
Е.соїі 0157 с использованием фагов
2.4. Разработка оптимальных условий постановки РНФ
2.4.1 .Определение количественного показателя реакции, имеющего
диагностическое значение
2.4.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего
наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.4.3. Использование РНФ для обнаружения Е.соїі 0157 в объектах
внешней среды
2.4.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной
E.coli 0157 с помощью РНФ
2.4.3.2 Исследование комбикорма, контаминированного E.coli 0157
с помощью РНФ
2.4.3.3. Исследование проб фекалий, контаминированные E.coli 0157
с помощью РНФ
2.4.4. Использование РНФ для обнаружения E.coli 0157 в пищевых
продуктах
2.4.4.1. Исследование мяса, контаминированного E.coli 0157 с помощью РНФ
2.5. Обсуждение
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ
ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
Актуальность работы
Escherichia coli являются распространенными возбудителями инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта у животных и человека (Покровский и др., 1989; Cantey, 1993; Тугаринов, Пирожков, Малахов, 2001).
В последнее время в научной литературе появилось большое число сообщений о вспышках гастроэнтеритов у людей, протекающих в тяжелой форме, вызванных E.coli 0157, которые образуют шигаподобный вероцито-токсин (Riley, Remis, Helgerson, 1983; Orskov, Orskov, Villar, 1987; Cryan, 1990; Bell, Goldoft, Griffin, 1994; Goldwater, Bettelheim, 1994; Whipp, Rasmussen, Cray, 1994; Anderson, de Jong, 1996; Armstrong, Hollingsworth, Morris, 1996; Easton, 1996; Ратинер и др., 1998). Заболевание, вызываемое этим серологическим вариантом эшерихий, может вызывать у детей и взрослых диарею, геморрагические колиты, гемолитический уремический синдром и тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (Shinoda et.al, 1997). Вспышки этой инфекции официально зарегистрированы во многих странах Северной и Южной Америки, Австралии, Европы, Азии, Африки и в нашей стране. Эшерихий серогруппы 0157 вызывают у молодняка животных диарею, геморрагический энтероколит и отечную болезнь у поросят (Тугаринов, Пирожков, Малахов, 2001).
Так как основным резервуаром инфекции является крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже лошади, олени, птица, то особенно опасны для людей пищевые продукты, полученные от этих животных (Armstrong, Hollingsworth, Morris, 1996; Easton, 1997), а также растительные продукты, выращенные на полях, куда мог вывозиться необеззараженный навоз от жи-вотных-носителей этой серогруппы эшерихий (Cieslak et al., 1993; Souichi et al., 1997). Не исключается заражение обслуживающего персонала при непо-

витии бактериальных вирусов показало, что процесс развития вирионов происходит в области нуклеоида. Структурные изменения обнаруживаются обычно не ранее 10-15 минут после инфекции фагом (Levinthal, Fisher, 1952) и проявляются в стирании четкой границы между ядерной субстанцией и цитоплазмой. В дальнейшем, идёт накопление фонда фаговой ДНК, её «конденсация» с образованием дискретных, лабильных структур с последующим их уплотнением. Вслед за образованием новых молекул фаговой ДНК и достижением ею определённого уровня, начинается синтез белков капсида и образование предшественника головки, в которую затем инкапсидируется ДНК. Заключительный этап внутриклеточного развития - самосборка фаговых частиц, разрыв клетки и высвобождение клеточных вирионов. Лизис инфицированных фагов бактерий связан, вероятно, с действием фаг-индуцируемых ферментов, которые способны деградировать клеточные стенки (Тихоненко, 1968).
Важной биологической особенностью каждого конкретного бактериофага является величина латентного периода - интервал между исчезновением высееных вирионов и выходом в среду новых фаговых частиц (Ревенко, 1978).
При постоянных условиях эксперимента продолжительность латентного периода характерны для каждой конкретной системы фаг-клетка (Гольд-фарб, 1961).
Важной биологической характеристикой бактериальных вирусов является также «урожай фага». Этот показатель у аэробных спорообразующих бактерий колеблется в пределах от 8 до 1370 корпускул на бактерию (Азиз-бекян, 1974).
У фагов других видов микроорганизмов урожай также имеет колебания в широком диапазоне (Колпикова, 1990).