Биосинтез ксиланаз грибами Trichoderma и бактериями p. Bacillus

• Автор: Скворцов, Евгений Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 155 с. : ил.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Биосинтез ксиланаз микроорганизмами и их свойства
1.1. Характеристика грибных ксиланаз
1.1.1 Ксиланазы грибов
1.1.2 Ксиланазы грибов Trichoderma
1.2. Характеристика бактериальных ксиланаз
1.2.1 Ксиланазы бактерий
1.2.2 Ксиланаз бактерий Bacillus
1.3. Методы анализа пентозанов и ксиланазной активности
2. Применение ферментных препаратов ксиланаз
2.1. Применение ксиланаз в кормах сельскохозяйственных
%, животных
2.2. Анализ ксиланазной активности в кормах
2.3. Применение ксиланаз в перерабатывающей промышленности
Заключение
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
. Материалы и методы исследований

Результаты исследований
1. Скрининг микроорганизмов иа способность гидролиза
пентозанов
1.1. Скрининг ксиланазной активности грибов Trichoderma
1.1.1. Культивирование продуцентов на жидких средах
^ 1.1.2. Исследование изменения вязкости растворов, содержащих
пентозаны под действием ферментов
1.2. Скрининг ксиланазной активности бактерий Bacillus
1.2.1. Культивирование продуцентов на жидких средах

1.2.2. Исследование изменения вязкости растворов, содержащих пентозаны под действием ферментов
2. Оптимизация состава питательных сред для индукции биосинтеза ксиланаз продуцентами
2.1. Оптимизация содержания ксиланов и белка в питательной среде
2.2. Использование целлюлозы для синтеза ксиланаз микроорганизмами
2.3. Роль углеводных мономеров в качестве регуляторов биосинтеза ксиланаз
2.4. Определение оптимального источника азота
2.5.Определение оптимального состава синтетических сред для максимальной продукции ксиланаз
2.5.1 Состав сред для грибов Trichoderma
2.5.2 Состав сред для бактерий Bacillus
3. Характеристика ксиланаз, полученных на природных средах, содержавших пентозаны
3.1. Получение сред, содержащих пентозаны
3.2. Биосинтез ксиланаз грибами Trichoderma
3.3. Биосинтез ксиланаз бактериями Bacillus
3.4. Ксиланазы изолятов Trichoderma
3.4.1. pH оптимум ксиланаз
3.4.2. Влияние температуры на активность ксиланаз
3.5. Ксиланазы бактерий Bacillus
3.5.1. pH оптимум ксиланаз
3.5.2 Влияние температуры на активность ксиланаз
4. Применение ксиланаз в кормовых рационах
4.1. Увеличение гидролизуемости при добавках ксиланаз в зерновые рационы
4.2. Применение ксиланаз при гидротермической обработке зерновых рационов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Культивирование грибов в глубинной культуре для биосинтеза ферментов Культуральные среды, засевали 2% инокулята. Культуры выращивали в 200 мл колбах, содержавших 100 мл среды в течение 72- 120 часов на лабораторных качалках с интенсивностью качания 200 об./мин при температуре 28°С при исходном значении pH 6.0. Клетки отделяли центрифугированием. Пробы для определения биомассы и ферментативной активности отбирали каждые 24 часа.
Оптимизация содержания ксилана и белка в питательной среде для биосинтеза ксиланаз
Грибные штаммы Trichoderma культивировали в течении 72 часов на средах, содержавших (%): КН2Р04 -0.1; MgS04-7H20 -0.05; КС1 -0.05; FeS04
0.001 и источники углерода и азота, приведенные в приложении 1, на лабораторных качалках с интенсивностью качания 200 об./мин при температуре 28°С при исходном значении pH 6.0. Клетки отделяли центрифугированием. Полученную культуральную жидкость анализировали на активность ксиланаз.
Контроль за ростом культур Прирост биомассы определяли по количеству высушенной после осаждения центрифугированием биомассы гриба.
Среднюю удельную скорость роста культуры (ц, час-1) за отрезок времени (to,ti) определяли по формуле:
р = (lnmi-lnmo)(ti-to), где то- величина биомассы в начале, пн- в конце этого отрезка времени (Иерусалимский, 1963; Перт, 1978).
Культивирование бактерий
Культивирование бактерий p.Bacillus для получения инокулята
Штаммы бацилл засевали «штрихом» на поверхность скошенного в пробирках L-arapa. Посевы выращивали при t=37°C в течение 24-72 часов.