Определение локализации белков беременности в тканях человека

• Автор: Куликов, Вячеслав Валерьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 116 с.

Диссертация выполнена на кафедрах медицинской биологии и генетики (зав. кафедрой - профессор Л.Г. Сентюрова) и биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики (зав. кафедрой - доцент, профессор АГМА Д.М. Никулина) ГОУ ВПО Астраханской государственной медицинской академии (ректор - профессор В.М. Мирошников).
ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕН] ТЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Биологическая роль белков беременности (ББ)
1.1.1. Продукция ББ при физиологически протекающей беременности
1 Л.2. Продукция ББ при патологии беременности
1.2. Современные представления о мишенях белков беременности
1.3. Белки беременности как диагностические тесты при заболеваниях человека
1.4. Современные представления о локализации и месте синтеза ББ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика и объем материала исследований
2.2. Методы исследований
2.2.1 Методы очистки антигенов и получения антисывороток
2.2.2 Гистологические и гистохимические методы
2.2.3 Метод иммунофлюоресценции
2.2.4 Методы.статистической обработки данных
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ
Г лава 3. Изучение общего белка и белков беременности в различных тканях человека в условии нормы и при патологии
3.1 Выделение и очистка СБАГ и ТБГ для последующего получения к ним антисывороток
3.2 Изучение общего белка и белков беременности в тканях плаценты человека
3.2.1. Морфология нормальной плаценты рожениц
3.2.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в плаценте
3.2.3. Иммунофлюоресцентное исследование ТБГ в плаценте
3.3. Изучение общего белка и белка беременности в печени
3.3.1. Морфология1 печени
3.3.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в печени
3.4. Изучение общего белка и белка беременности в аппендиксе
3.4.1. Морфология-червеобразного отростка
3.4.2. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в аппендиксе
3.5. Изучение общего белка и белков беременности в эндометрии
3.5.1. Морфология эндометрия в норме
3.5.2. Морфология малигнизированного эндометрия
3.5.3. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в нормальном и малигнизированнном эндометрии
3.6. Изучение общего белка и белка беременности в толстом кишечнике
3.6.1. Морфология толстого кишечника в норме

3.6.2. Морфология малигнизированного толстого кишечника
3.6.3. Иммунофлюоресцентное исследование СБАГ в нормальном и малигнизированном толстом кишечнике
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Кровь для приготовления сыворотки брали пункцией кубитальной вены в количестве 10,0 мл или из пальца у взрослых людей натощак. У новорожденных - из пуповины сразу после ее рассечения. Ретроплацентарную кровь получали при родах в последовом периоде. Сыворотку отделяли от форменных элементов крови методом центрифугирования, консервировали 1% раствором азида натрия и хранили при температуре -18° С.
Для проведения реакции иммунофлюоресценции использовали анти-кроличьи диагностические иммуноглобулины, меченные флуоресцин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ) из НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалея.
2.2. Методы исследований
2.2.1. Методы очистки антигенов и получения антисывороток
Процесс получения антисывороток к СБАГ и ТБГ состоял из следующих этапов: приготовление иммунизирующего Аг (иммуногена); иммунизации животного; оценки полученной Ас; обработки Ас, включая при необходимости адсорбцию лиофилизированной плазмой доноров. Приготовление АГ и получение антисывороток составило первую часть собственных исследований.
Исходным биоматериалом для выделения и очистки исследуемых белков-антигенов служила сыворотка крови женщин с поздними сроками беременности. В работе использовали сочетание методов высаливания, ионообменной, гель-проникающей хроматографии и препаративного иммуноэлектрофореза. Идентификацию Аг в препаратах с каждого этапа очистки проводили классическими иммунохимическими методами: иммунодиффузионным титрованием и аналитическим иммуноэлектрофорезом. При иммунизации использовали в качестве лабораторных животных кроликов, которым в течение месяца вводили антиген дробными дозами.
Антисыворотки на исследуемые белки получали иммунизацией кроликов породы шиншилла, вес 2-3 кг, дробными дозами антигена в течение месяца.