Галектин-опосредованное связывание вируса гриппа с клетками-мишенями

• Автор: Черный, Евгений Станиславович
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 170 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список использованных сокращений
1 ВВЕДЕНИЕ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1 Структурные компоненты вируса гриппа 1 1 Структура нейраминидазы 1 2 Гликозилирование нейраминидазы 1 3 Структура гемагглютинина
1 4 Гликозилирование гемагглютинина
Глава 2 Сборка и отпочковывание (баддинг) вируса гриппа
2 1 Липидный состав вируса гриппа
2 2 Роль НА и ИА в сборке и баддинге вирионов
2 3 Роль М1 и М2 в сборке и баддинге вирионов Глава 3 Структурная организация вируса гриппа
3 1 Современные методы изучения морфологии вируса гриппа 3 2 Размеры и форма вирионов
3 3 Поверхность вируса гриппа Глава 4 Галектины
4 1 Структура галектинов
4 2 Биологическая роль галектинов 4 3 Куриные галектины
3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1 Проверка первых двух гипотез Роль белков в составе вириона
1 1 Поиски белков клетки-хозяина
1 2 Поиск «неклассических» углеводных рецепторов
для вируса гриппа
2 Взаимодействие вируса гриппа с галектинами
2 1 Изучение связывания вируса гриппа с галектинами
с помощью твердофазного анализа 2 2 Влияние галектинов на функционирование НА и
NA вируса гриппа
3 Ингибирование галектинами связывания антител с вирусом
3 1 Ингибирование связывания поликлональных антител с вирусом гриппа 3 2 Ингибирование галектинами связывания сыворотки больных гриппом с вирусом гриппа
3 3 Ингибирование галектинами связывания
внутривенного иммуноглобулина с вирусом гриппа
4 Роль галектинов на стадии адгезии вирионов на клетке
4 1 Расположение галектинов и вируса гриппа на поверхности клетки 4 2 Изучение влияния галектинов на связывание вируса гриппа
с клетками
4 3 Проверка влияния флуоресцентной метки на связывание вируса с галектинами 4 4 Действие галектинов при нагрузке на вирионы 4 5 Ингибирование взаимодействия галектинов с вирусом 4 6 Влияние на адгезию гликома вируса и клеточной поверхности
4 7 Связывание вируса с десиалилированными клетками в присутствии галектинов
5 Мечение вирусов гриппа с помощью флуоресцентного липида
6 Исследование полного цикла заражения вируса
в присутствии галектинов
6 1 Влияние галектинов на заражение монослоя клеток вирусом 6 2 Действие галектинов на эффект заражения клеток вирусом гриппа, сравнение разных условий проведения эксперимента
7 О возможности участия галектинов в инфекционном процессе
вируса гриппа
5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6 ВЫВОДЫ
7 Благодарности
8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений
АЭК - аминоэтилкарбазол FITC - флуоресцеинизотиоционат ДСН - додецилсульфат натрия Fluo-DOPE - флуоресцентный липид ГАЕ - гемагглютинирующая единица М - матриксный белок НА - гемагглютинин
НВ-сайт - гемоадсорбционный сайт нейраминидазы РГА - реакция гемагглютинации ТФА - твердофазный анализ РНП - рибонуклеопротеин
MDCK - линия клеток Madin-Darby Canine Kidney
NA - нейраминидаза
NP - нуклеопротеин
NS - неструктурный белок
CG - Куриные галектины
hG - Человеческие галектины
УСД - углевод связывающий домен
Сахариды, конъюгаты и субстраты NA:
Glyc-PAA-biot - биотинилированный гликоконъюгат конъюгат на основе полиакриламида
Neu5Ac - N-ацетилнейраминовая кислота
3’SL - Neu5Aca2-3Gaipi-4Glc
3’SLN - Neu5Aca2-3Gaipi-4GIcNAc
6’SLN - Neu5Aca2-6Gaipi-4GlcNAc
Lex - Gaipi-4(Fucal-3)GlcNAcP
B,n- Galal-3(Fucal-2)Galp
Fs-2 - GalNAcal -3GalNAcp
Tn - aGalNAc
LacNAc - Gaipi -4GlcNAc
А тип 1 - GalNAcal-3(Fucal-2)Gaipi-3GlcNAc
А тип 2 - GalNAcal-3(Fucal-2)Gaipi-4GlcNAc
В тип 1 - Galal-3(Fucal-2)Gaipi-3GlcNAc
В тип 2 - Galal-3(Fucal-2)Gaipi-4GlcNAc
H тип 1 - Fucal-2Gaipi-3GlcNAc
Н тип 2 - Fucal-2Gaipi-4G!cNAc
MU-NANA - метилумбеллиферил N-ацетилнейраминовая кислота BODIPY - 6-((4,4-дифторо-5,7-диметил-4-бора-За,4а-даиза-5-индацин-3-пропионил)амино)гексаноилвая кислота сукцинимидный эфир

условий развития инфекции не выявлено, также как и изменений в структуре белков, формирующих вирионы - Ml и М2. Обе формы вируса гриппа несут одну копию вирусного генома, имеют одинаковое соотношение НА и NA и одинаково инфекционны (Calder and others 2010; Noda and others 2006b; Roberts and others 1998; Rossman and others 2010b). Заражение филаментарными вирионами может приводить к образованию не только протяженных, крупных вирионов, но и небольших частиц сферического типа. Так филаментарный штамм A/Udom/72 при выращивании на культуре MDCK производит вирионы капсулярного типа, представляющие из себя цилиндры длинной порядка 120 нм и с полусферическими утолжениями на концах (Рис. 4а), а также «истинные» филаментарные вирусные частицы длиной более 1 мкм (Рис. 46).