Фенотипические и функциональные свойства мезенхимальных стромальных клеток человека в норме и при иммунопатологических заболеваниях

• Автор: Шевела, Екатерина Яковлевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 167 с. : 12 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. МУЛЬТИПОТЕНТНЫЕ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ: БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫЕ СВОЙСТВА В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ)
1.1 Общая характеристика МСК
1.1.1 Идентификация МСК
1.1.2 Гетерогенность МСК in vitro
1.1.3 МСК in vivo
1.2 МСКигемопоэз
1.3 Иммунорегуляторные свойства МСК
1.3.1 Иммуносупрессорная активность МСК
1.3.2 Иммуностимуляторная активность МСК
1.4 Регуляция функциональной активности МСК
1.5 Особенности МСК различного тканевого происхождения
1.6 Изменение свойств МСК при патологии
1.7 Клиническое использование МСК
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика больных, включенных в исследование
2.2. Генерация и свойства МСК
2.2.1 Получение и культивирование мононуклеарных и ядросодержащих
клеток
2.2.2. Определение числа клоногенных предшественников МСК
2.2.3 Ростовые и морфометрические характеристики
2.2.4 Оценка фенотипа МСК
2.2.5 Оценка дифферснцировочного потенциала МСК
2.2.6 Анализ иммуносупрессорной активности МСК
2.2.7 Гемопоэзстимулирующая активность
2.2.8 Оценка продукции цитокинов

2.3 Апробация ко-трансплантации ГСК и МСК у больных лимфомами
2.3.1 Оценка раннего восстановления лимфоцитов (РВЛ)
2.3.2 Оценка субпопуляций Т-лимфоцитов методом проточной флуориметрии
2.4 Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) взрослого организма: сравнительная характеристика МСК различного тканевого
происхождения
3.1.1 Клоногенность, пролиферативная активность и морфометрические особенности МСК
3.1.2 Фенотипическая характеристика и дифференцировочный потенциал МСК
3.1.3 Мультиплексный анализ биологически активных медиаторов, продуцируемых мезенхимальными стромальными клетками
3.1.4 Гемопоэзстимулирующая и иммуносупрессорная активность МСК
3.2 Характеристика МСК костного мозга при различных заболеваниях83
3.2.1 Клоногенность и пролиферативная активность МСК
3.2.2 Фенотипическая характеристика и дифференцировочный потенциал МСК
3.2.3 Биологически активные медиаторы, продуцируемые МСК
3.2.4 Оценка гемопоэзстимулирующей активности МСК
3.2.5 Исследование иммуносупрсссорной активности МСК
3.3 Механизмы МСК-опосредованной иммуносупрессии
3.3.1 Активационные маркеры
3.3.2 Простагландин Е2 и индоламин-2,3-диоксигеназа
3.3.3 Интерлейкин
3.3.4 Оксид азота
3.3.5 НЬА-С
3.4 Основной фактор роста фибробластов в коррекции нарушений МСК
3.5 Влияние МСК на иммунную реконституцию и клиническую эффективность при трансплантации ГСК у больных злокачественными лимфомами
3.5.1 Ретроспективный анализ ко-трансплантации МСК и ГСК у больных злокачественными лимфомами
3.5.2 Влияние МСК на длительность периода цитопенпи
3.5.3 Влияние МСК на раннее восстановление лимфоцитов
3.5.4 Влияние МСК на восстановление различных субпопуляций Т-лимфоцитов

3.5.5 Влияние МСК на реконституцию регуляторных Т-клеток
3.5.6 Осложнения после ауто-ТГСК и ко-трансплантации МСК и ГСК
3.5.7 Влияние МСК на общую выживаемость
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
Список сокращений
МСК Мезенхимальные стромальные клетки
КМ-МСК, П-МСК, МСК, полученные из костного мозга, плаценты и жировой
Ж-МСК ткани соответственно
ИДО Индоламин-2,3-диоксигеназа
ИОД Индекс остеогенной дифференцировки
МНК Мононуклеарные клетки
СКЛ Смешанная культура лимфоцитов
Апти-СВЗ Анти-СОЗ антитела
СО Кластер дифференцировки
ЕвР Эпидермальный фактор роста
ЕРО Эритропоэтин
РОР-Ьазіс (ЬРОР) Основной фактор роста фибробластов в-СБР Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
ОМ-С8Р Гранулоцитарно-макрофагальный
колониестимулирующий фактор НЬА-ОК БЛ антигены главного комплекса гистосовместимости
эНЛА-О 1/5 Растворимые изоформы НЬА-О 1/5
ШИ-а, ШИ-у Интерфероны а и у
ЮБ Инсулиноподобный фактор роста
ІЬ-2,1Ь-4 и др. Интерлейкин-2, интерлейкин-4 и др.
ЬРБ Липополисахарид
РСіЕ2 Простагландин Е2

клетки. Действительно, имеются данные, свидетельствующие о подобной возможности и позволившие, по крайней мере, двум независимым группам ученых сформулировать представление о МСК как о новом типе антигенпрезентирующих клеток [49, 195]. Если же фагоцитоз, опосредуемый МСК, является иммунологически инертным событием, это свидетельствует о толерогенных свойствах МСК. В ближайшем будущем, несомненно, появятся новые данные по характеристике фагоцитарного процесса, условий проявления фагоцитарной активности, иммунологических последствий и регуляторных механизмах этой, нетипичной для МСК, функции, что приведет к осмыслению биологической роли способности МСК к фагоцитозу.
Наличие иммуностимуляторных свойств продемонстрировано не только для костномозговых МСК. Сравнительно недавно ТесЬпаи с соавт. было показано, что МСК жировой ткани, дифференцированные в хондрогенном направлении, проявляют одновременно иммуногенный и иммуносупрессорный фенотип. Так, в отличие от недифференцированных клеток, ТОРрЗ-индуцированные МСК уже с 7-го дня культивирования в индукционной среде экспрессировали НЬА-ВК, при этом возрастала также экспрессия НЕА-й и 11.-10 [204].
Подобный функциональный «дуализм» описан и для МСК, полученных из амниотического листка плаценты. В отличие от костного мозга, культуры плацентарных МСК содержат популяции как НЕА-БИ-позитивных, так и НЕА-БИ-негативных клеток, причем клетки обеих популяций не способны стимулировать пролиферативный ответ аллогенных Т-лимфоцитов. В то же время НЕА-ПШ- (но не НЕА-011-) МСК проявляют выраженный стимулирующий эффект в отношении а-СПЗ -стимулированных Т-клеток [137]. Авторы предполагают, что существование субпопуляций МСК с оппозитными свойствами может в какой-то степени объяснить противоречия, нередко встречающиеся при характеристике свойств МСК.