Сравнительная характеристика натуральных киллерных клеток человека в норме и при раке легкого

• Автор: Перфильева, Юлия Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Алматы
• Количество страниц: 117 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Общие сведения об ЫК-клетках
1.1.1 Общая фенотипическая и функциональная характеристика №С-клеток человека
1.1.2 Классификация МК-клеток
1.1.3 Рецепторы, опосредующие активацию и супрессию эф-
фекторных функций МК-клеток
1.1.4 Механизмы цитотоксичности МК-клеток
1.1.5 Секреторная функция МК-клеток. Регуляторные МК-
клетки
1.2 Роль МК-клеток в противоопухолевом иммунитете
1.2.1 Общая характеристика онкологического процесса
1.2.2 Рак легкого и его классификация
1.2.3 Система противоопухолевого иммунитета
1.2.4 ИК-опосредованный противоопухолевый надзор
1.2.5 Участие молекул адгезии и хоуминга в миграции МК-
клеток к опухоли
1.2.5.1 Участие Ь-селектина в миграции МК-клеток к опухоли
1.2.5.2 Роль СБ44 в миграции МК-клеток
1.2.5.3 Роль СХСІ14 в миграции МК- клеток к опухоли
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материал для исследования
2.2 Реактивы и оборудование
2.3 Приготовление культуральных сред и буферных раство-

2.4 Получение NK-клеток из периферической крови человека
2.5 Проточная цитофлуориметрия
2.6 Культивирование опухолевых клеток
2.7 Цитотоксический тест
2.8 Оценка продукции IL-10 NK-клетками с использованием
IL-10 Secretion Assay Detection Kit (PE)
2.9 ELISPOT-анализ
2.10 Методы статистической обработки результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Изучение маркеров цитотоксичности NK здоровых доноров и больных раком легкого
3.2 Анализ продукции цитокинов NK-клетками здоровых доноров и больных раком легкого
3.3 Сравнительная характеристика экспрессии молекул адгезии и хоуминга на NK-клетках в норме и при раке легкого
3.3.1 Экспрессия молекул CD44, CD62L на поверхности NK-
клеток больных раком легкого и здоровых доноров
3.3.2 Экспрессия CXCR4-рецептора. Оценка влияния хемокина
SDF-1 на экспрессию рецептора CXCR4 на NK-клетках периферической крови
3.3.3 Влияния активации L-селектин-опосредованного сиг-
нального пути на экспрессию рецептора CXCR4 на NK-клетках здоровых доноров и больных раком легкого
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

Список сокращений
АГ антиген
АПК антигенпрезентирующая клетка
АФП альфа-фетопротеин
БСА бычий сывороточный альбумин
Д донор
ИФА иммуноферментный анализ
ЛАК лимфокин-активированная киллерная клетка
РЛ рак легких
7AAD 7-аминоактиномицин D
ADAM17 A Disintegrin and Metalloproteinase Domain
BID агонист смерти, взаимодействующий с доменом ВНЗ
BSA бычий сывороточный альбумин
СА 125 раковый антиген
CCL хемокиновый лиганд (С-С-остаток)
CD кластер дифференцировки
CFSE карбоксифлуоресцеиндиацетат-сукциниламид эфир
СопА конканавалин А
CXCR4 С-Х-С хемокиновый рецептор тип
DMSO диметилсульфоксид
EDTA этилендиаминотетраацетат
ELISPOT Enzyme-Linked Immunosorbent Spot
FITC флуоресцеинизотиоцианат
GlyCAM-1 Glycosylation-dependent Cell Adhesion Molecule
GM-CSF гранулоцитарно-макрофагальный
колониестимулирующий фактор HLA человеческий лейкоцитарный антиген

ши, обработанные циклофосфамидом или аптичшак) ОМ1 антителами) имели высокую частоту развития спонтанных и экспериментальных опухолей и их ме-тастазирования [194]. Животные с высоким уровнем ЫК-клеточиой активности (обработанные СогупеЬас1егшт рапшт или №N7) показывали устойчивость к развитию метастазов [91]. Адаптивный перенос спленоцитов от мышей с высокой активностью ЫК-клеток частично восстанавливал антиметастатическую способность мышей, обработанных антиасиало ОМ1 и циклофосфамидом [84].
Большое количество данных свидетельствует об участии МС-клеток в иммунобиологическом надзоре над развитием онкологических заболеваний у человека. Одиннадцатилетнее эпидемиологическое исследование показало, что низкий уровень МС-клеточной активности в периферической крови ассоциирован с риском развития онкологических заболеваний [104].
У пациентов, получавших иммунодепрессанты, высокий риск развития онкопатологий сопутствовал низкой N10-клеточной активности [49]. Больные ге-моглобинурией имели низкую ЫК-клеточную активность и высокий риск развития лейкемии [212]. Часть исследований показала, что у онкологических больных значительно снижена цитотоксическая активность МС-клеток периферической крови [98, 136, 178]. Другие исследователи не обнаружили снижения активности МС-клеток у пациентов с некоторыми видами рака, независимо от стадии заболевания [67]. Исследования показывают, что уровень активности МС-клеток периферической крови позитивно коррелирует с прогнозом онкологического заболевания. Так, рак молочной железы у пациентов с нормальной цитолитической активностью МС-клеток периферической крови после терапии метастазировала реже, чем у пациентов с низкой цитолитической активностью [158]. Цитотоксическая активность МС-клеток у больных раком легкого с метастазами была ниже, чем у пациентов без метастазов [145]. У пациентов с карциномой головы и шеи уровень цитолитической активности МС-клеток до терапии обратно пропорционально коррелировал с частотой развития региональных и дистантных метастазов [171].