Влияние физических нагрузок на концентрацию ростовых факторов человека

• Автор: Сахаров, Дмитрий Андреевич Андреевич
• Шифр специальности: 14.00.51
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : 45 ил.

Оглавление
Список используемых сокращений
Введение
Глава I. Ростовые факторы и гены раннего ответа (Обзор
литературы)
Глава II. Материалы и методы исследования - 43
Г лава III. Антитела против гормона роста, аффинные сорбенты и конъюгаты антител - 52
Глава VI. Нагрузочное тестирование и концентрация ростовых
факторов ~ 97
Глава VII. Гены раннего ответа
Глава VIII. Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Приложение. Акты о внедрении

Список используемых сокращений
AJTT - аланинаминотрансфераза
ACT - аспартатаминотрансфераза
AT - антитело
АТФ - аденозин трифосфат
ГР - гормон роста, соматотропный гормон (GH)
ГРВГ - гормон роста высвобождающий гормон, соматолиберин (GHRH) ГРО - гены раннего ответа (IEG)
ГРР - рецептор гормона роста (GHR)
ГРСБ - гормон роста связывающий белок (GHBP)
ГРСЛ - гормон роста секреторный лиганд, грелин (Ghrelin)
ГРСР - гормон роста секреторный рецептор (GHSR)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИФА — иммуноферментный анализ
ИФР - инсулиноподобный фактор роста, соматомедин (IGF)
ИФРСБ - инсулиноподобный фактор роста связывающий белок (IGFBP) кДНК - кодирующая дезоксирибонуклеиновая кислота КФК - креатинфосфокиназа ЛП - лактатный порог (LT)
МПК — максимальное потребление кислорода мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ОСТ - остеокальцин (OST)
ПЛАТ - полиакриламидный гель ПАГІО - порог анаэробного обмена ПЦР - полимеразная цепная реакция рГР - рекомбинантный гормон роста (rGH)
РІЖ - рибонуклеиновая кислота ССТ - соматостатин (SST)
ЦНС - центральная нервная система
GAMI - антитела козы против иммуноглобулинов мыши, конъюгат с пероксидазой
GARI - антитела козы против иммуноглобулинов кролика, конъюгат с пероксидазой
Ps-Avs - стрептавидин пероксидаза
Введение

Физические нагрузки являются одним из основных стимулов активации системы гормон роста (ГР) - инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР1) (Gibney J., 2007; Nindl B.C., 2007), играющей важную роль в процессах клеточного роста и развития. В крови присутствуют несколько сплайс-изоформ гормона роста и инсулиноподобного фактора роста (Baumann G., 1991а). Сплайсинг их пре-мРНК осуществляется в ядре клетки при участии сплайсосомы - мегадальтонного комплекса между РНК и белками. Известно, что различные стрессорные факторы оказывают влияние на функционирование сплайсосомы и могут приводить к изменению ее активности или нарушениям сплайсинга. Таким образом, исследование влияния физического стресса на процесс сплайсинга гормона роста, соотношение его изоформ в крови, а также на систему ростовых факторов в целом, является современной задачей восстановительной и спортивной медицины.
Известно, что физические нагрузки разной интенсивности приводят к запуску большого количества биохимических, молекулярных и генетических механизмов, лежащих в основе адаптационных реакций организма на физиологический стресс (Coffey V.G., 2007а). Процессы адаптации организма к кратковременным высокоинтенсивным физическим нагрузкам связаны как с появлением изоформ ростовых факторов, так и с активацией системы генов раннего ответа (ГРО), и привлекают все больше внимания исследователей (Buttner Р., 2007; Connolly Р.Н., 2004).
Начальными активаторами ГРО являются стрессорные факторы, связанные с физической нагрузкой (гипотермия, ишемия, метаболический стресс, изменение электролитного баланса и т.п.), которые могут воздействовать на экспрессию ГРО как напрямую, так и опосредованно -через гуморальную систему и ЦНС (Simon Р., 2006).

является сравнение уровней экспрессии различных генов до и после интенсивной физической нагрузки. Изменение уровня экспрессии какого-либо гена, определенное по увеличению или уменьшению количества мРНК в образцах до и после нагрузки, в таком эксперименте позволяет с большой долей достоверности сделать заключение о вовлеченности его (и, как следствие, кодируемого им белка) в процесс реакции организма спортсмена на нагрузку.
Основным методом оценки уровня экспрессии генов в настоящее время является анализ представленности транскриптов геномной ДНК (мРНК). Существует два наиболее часто используемых подхода к такому анализу -полуколичественное определение мРНК методом ПЦР в реальном времени, а также исследования с помощью транскрипционных матриц (микроэррей). В первом случае, можно оценить представленность только одного транскрипта в образце, тогда как в микроэррей-исследовании количество одновременно анализируемых транскриптов ограничено только типом и емкостью используемой матрицы. Результатом микроэрей-исследования является так называемый «генетический отпечаток», уникальный для данного исследуемого объекта в конкретной экспериментальной точке. Однако, несмотря на очевидные преимущества метода транскрипционных матриц (быстрота исполнения эксперимента, меньшая степень зависимости результатов от пробоподготовки), он является достаточно дорогим, и математико-статистические методы анализа и интерпретации полученных результатов недостаточно отработаны. Кроме того, из-за различия методик проведения микроэррей-исследований и отсутствия в достаточной степени стандартизованных протоколов представляется затруднительным сравнение результатов двух независимых микроэррей-экспериментов между собой. В силу этих причин, в настоящее время больше распространен классический метод ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).