Изучение физико-химических особенностей потивирусов, поражающих растения семейств Brassicaceae, Commelinaceae и Fabaceae на Дальнем Востоке

• Автор: Моисеенко, Лариса Игнатьевна
• Шифр специальности: 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 Краткая характеристика вирусов потигруппы
1.1. Общие сведения о биологии потивирусов
1.2. Физико-химические особенности потивирусов
1.2.1. Седиментационные характеристики
1.2.2. Оптические свойства
1.2.3. Свойства белка оболочки
1.2.4. Структура.генома
1.3. Включения
1.4. Характеристика антигенных свойств
1.5. Таксономия
1.6. Дальневосточные потивирус
1.6.1. Вирус мозаики турнепса
1.6.2. Вирус традесканции белоцветковой
1.6.3. Вирус мозаики клевера горного
ГЛАВА 2. Материал и методы
2.1. Материал
2.2. Получение препаратов вирусов
2.2.1. Выделение вируса мозаики турнепса
2.2.2. Выделение вируса традесканции белоцветковой
2.2.3. Выделение вируса мозаики клевера горного
2.2.4. Физические свойства вируса мозаики клевера горного
2.3. Спектрофотометрическая характеристика препаратов
2.4. Электронная микроскопия препаратов потивирусов
2.5. Иммунохимические методы
2.6. Исследование седиментационных свойств вируса традесканции белоцветковой
2.7. Электрофорез белков потивирусов
2.8. Сравнительное пептидное картирование белков
2.9. Выделение РНК потивирусов
2.9.1. Характеристика РНК потивирусов
2.9.2. Фракционирование РНК потивирусов методом электрофореза
2.9.3. Трансляция РНК потивирусов
ГЛАВА 3. Результаты экспериментальных исследований
3.1. Вирус мозаики турнепса
3.1.1. Антигенные свойства
3.2. Изучение деформирующей мозаики редиса
3.3. Вирус традесканции белоцветковой
3.4. Вирус мозаики клевера горного
3.4.1. Биологические и физические свойства
3.4.2. Получение препарата вируса мозаики клевера горного
3.4.3. Антигенные свойства вируса мозаики клевера горного
3.5. Характеристика РНК потивирусов
3.5.1. Трансляция вирусных РНК
ГЛАВА 4. Изучение процесса деградации капсидных белков
потивирусов
4.1. Протеолитическое расщепление капсидных белков
в процессе хранения препаратов вирусов "
4.2. Сравнительное пептидное картирование белков потивирусов. ГЛАВА 5. Обсуждение
5.1. Выделение потивирусов
5.2. Спектрофотометрическая характеристика
5.3. Электронная микроскопия
5.4. Седиментационные свойства вируса традесканции
белоцветковой
5.5. Свойства структурных компонентов
5.5.1. Белковые компоненты
5.5.2. Характеристика РНК потивирусов
5.6. Антигенные свойства потивирусов
5.7. Вредоносность изученных вирусов
5.8. Деформирующая мозаика редиса
5.9. Изучение деградации капсидных белков трех дальневосточных потивирусов в процессе очистки и хранения
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
дили, как описано Д.В. Клевеландом с соавторами (Cleveland et al., 1977). Зоны геля, содержащие 20-25 мкг нативного белка капсиды, вырезали после окрашивания Кумасси R-250 (время окраски и обесцвечивания не превышало 60-90 мин.), вымачивали в 0,0625 М трис-HCI буфере (pH 6,8) с 1 мМ ЭДТА и 0,1% додецилсульфатом натрия в течение 30 мин. и помещали в ячейку 3% концентрирующего геля. На кусочки геля наслаивали раствор глицерина (20%) и 10-15 мкл раствора папаина или химотрипсина ("Serva") в том же буфере с глицерином (10%). Электрофорез проводили в системе Лэммли (Laemmli, 1970). В состав буфера концентрирующего геля длиной 5 см входил 1 мМ ЭДТА. В качестве разделяющего геля использовали градиентный (10-30% со сшивкой мономеров 1:20) полиакриламидный гель длиной 14-15 см. Электрофорез проводили при силе тока 20 мА до того момента, когда фронт красителя (бромфенолового синего) подходил к границе разделяющего геля. Ток отключали на 30-40 мин., для проведения гидролиза, затем разделение продолжали в течение 12 час при постоянном напряжении 100 В. После окончания электрофореза пластины геля окрашивали Кумасси R-250, как обычно.
2.9. ВЫДЕЛЕНИЕ РНК ПОТРШИРУСОВ. Для выделения вирусных РНК использовали модифицированный метод фенольной депротеинизации в присутствии додецилсульфата натрия. Трудности при выделении связаны с тем, что что РНК весьма чувствительна к рибонуклеазам (РНК-азы), примесь которых может присутствовать даже в высокоочищенных препаратах вируса. В связи с этим все операции при выделение РНК производили при 4 °С, pH буферов поддерживалась не менее 9,0. К вирусной суспензии (концентрация вируса не превышала 5 мг/мл) в 0,1 М трис-буфере pH 9,0 добавляли додецилсульфат натрия до 2% и 2 - меркаптоэтанол до 0,5% и прогревали 5 мин. при 50 °С. После этого к раствору, содержащему вирус, добавляли равный объем смеси водонасыщенный фенол:хлороформ:изоамиловый спирт (25:24:1) и встряхивали в течение 20 мин. до образования гомогенной эмульсии. Фазы разделяли цен-