Синапсис и рекомбинация у млекопитающих - носителей хромосомных перестроек

• Автор: Торгашева, Анна Александровна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 133 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
Актуальность проблемы
Цель и задачи работы
Научная новизна
Научно-практическая ценность
Основные положения, выносимые на защиту
Личный вклад автора
Апробация работы
Публикации
Структура и объём работы
Благодарности
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Основные события мейоза
Регуляция распределения сайтов рекомбинации
«Горячие точки» рекомбинации
Особенности организации хроматина
Регуляция синапсиса и рекомбинации на хромосомном уровне
Интерференция
Размер СК
Влияние хромосомных перестроек на синапсис и рекомбинацию
хромосом млекопитающих
Роль перестроек в кариотипической эволюции
Влияние робертсоновских транслокаций
Влияние инверсий
Синапсис и рекомбинация хромосом у межвидовых гибридов
Обоснование модели
Метод
Робертсоновские транслокации

Инверсии
Гибриды
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Животные
Приготовление препаратов распластанных хромосом
Иммуноокрашивание
Приготовление гибридизационной пробы для хромосомы 1 мыши
Получение C0t-1 ДНК мыши
Переосаждение меченого зонда с C0t-1 ДНК мыши
Флуоресцентная гибридизация in situ
Микроскопический анализ и обработка изображений
Идентификация бивалентов
Измерение и статистический анализ
РЕЗУЛЬТАТЫ
Синапсис и рекомбинация хромосом у носителей робертсоновских
транслокаций (на примере обыкновенной бурозубки Sorex araneus)
Характеристика СК аутосом
Частота сайтов MLH1 в аутосомах обыкновенной бурозубки
Распределение сайтов MLH1 в инвариантных хромосомах
Влияние гомо- и гетерозиготносте по робертсоновским
транслокациям на распределение сайтов MLH1
Синапсис и рекомбинация у гомо- и гетерозигот по парацентрическим
инверсиям (на примере домовой мыши Mus musculus)
Идентификация бивалента 1 и границ инверсии
Влияние пола на синаптические и рекомбинационные
характеристики бивалента
Влияние порядка генов на синаптические и рекомбинационные характеристики бивалента 1 (у нормальных гомозигот и гомозигот
по инверсии)
Синаптические конфигурации бивалента 1 у самок, гетерозиготных по инверсии

Вариации синаптических характеристик бивалента 1 у самок,
гетерозиготных по инверсии в течение пахитены
Влияние гетерозиготности по инверсии 1п(1)111к на частоту сайтов
МЕНІ в биваленте 1 у самок
Влияние гетерозиготности по инверсии 1п(1)1Лк на распределение
сайтов МЫ11 в биваленте 1 у самок
Синапсис и рекомбинация хромосом у гетерозигот по перицентрическим инверсиям (на примере муйской полевки Місгоіш
тіуапетіз)
Синапсис хромосом муйской полевки
Частота и распределение сайтов МБН1 в биваленте 14 муйской
полевки
Синапсис и рекомбинация у гибридов между видами-близнецами, различающимися по кариотипам (на примере гибридов Місгоїт
ап’аііз ап-аіі.ь' и Місгоїт гонніаетегісііопаїін)
Особенности мейоза у самцов гибридов М. а. агуаШ и
М.гоззіаетегісііопаїіз
Характеристика синапсиса у самок гибридов М. а. стіаіів и
М.гоязіаетегісііопаїіз
Характеристика рекомбинации у самок гибридов М. а.агуаіі.'і и
М.го88ІаетегісііопаІІ8
ОБСУЖДЕНИЕ
Пространственная организация хромосом в профазе мейоза и синапсис
хромосом у гетерозигот по перестройкам
Замена гомологичного синапсиса на негомологичный в результате
синаптической подгонки
Нарушения спаривания хромосом у межвидовых гибридов
Изменение паттернов рекомбинации у носителей хромосомных
перестроек, его причины и эволюционные последствия
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

серии охлажденных спиртов возрастающей концентрации (70%, 80%, 96% и 100%) по 2 минуты.
Затем препараты высушивали на воздухе и под большое покровное стекло (55мм х 24мм) наносили 40 мкл ДНК пробы и C0t-1 ДНК в гибридизационной смеси. Гибридизацию проводили в течение ночи во влажной камере в термостате при 42°С.
По окончании гибридизации покровные стекла аккуратно смывали в 2xSSC, а препараты последовательно отмывали по три минуты в трех растворах 2xSSC и в растворе свежеприготовленного 50% формамида в 2xSSC на водяной бане при температуре 45°С. После чего высушивали на воздухе, окрашивали раствором DAPI с реагентом, препятствующим выгоранию препарата, в концентрации 1,5 мкг/мл и накрывали покровным стеклом.
Микроскопический анализ и обработка изображений
Препараты анализировали на эпифлуоресцентном микроскопе Axioplan 2 (Carl Zeiss, Германия), оборудованном CCD-камерой (CV М300, JAI), набором фильтров CHROMA и пакетом обработки изображений ISIS4 (MetaSystems GmbH, Германия). Три флуоресцентных сигнала (синий: SCP3 - А1еха450 или DAPI; красный: SCP3 или SCP1 - СуЗ, Distl - TAMRA; зеленый: MLH1, АСА, RAD51 или уН2А.Х - FITC) фиксировались как чернобелые изображения и объединялись автоматически с помощью программного обеспечения 1SIS4.
Анализировали клетки с неповрежденным СК и четкими сигналами MLH1. Поскольку при гибридизации на препаратах после иммуноокрашивания сигнал MLH1 и АСА удалялся, использовали следующий подход. Клетки после иммуноокрашивания фотографировали, записывали их координаты на стекле, затем после гибридизации, проводили повторную регистрацию изображения.