Выделение и анализ стволовых клеток из зачатков пульпы третьего моляра человека

• Автор: Блатт, Наталия Львовна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 122 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) — улучшенный зелёный флуоресцентный белок
FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting) — флуоресцентно-активируемая клеточная сортировка
FBS (Fetal Bovine Serum) — фетальная телячья сыворотка
PBS (Phosphate Buffered Saline) — фосфатно-солевой буфер
ГСК —- гемопоэтические стволовые клетки
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота
кДЕПС — комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота
мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота
ОТ-ПЦР — обратная транскрипция — полимеразная цепная реакция ПЦР — полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ — полимеразная цепная реакция в реальном времени РНК — рибонуклеиновая кислота т.п.н. — тысяч пар нуклеотидов
DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) — среда Игла, модифицированная Дульбекко
SH-SY5Y — культура раковых клеток нейробластомы человека DPBS (Dalbecco Phosphate Buffered Saline) — фосфатно-солевой буфер Дальбекко
PenStrep (Penicillin - Streptomycin) — смесь пенициллина и стрептомицина
Плуроники Р85, РЕ240 и РЕ24006 — неионные полиэфирные белок-сополимеры
NCI (National Cancer Institute) — Национальный Институт Рака МСК — мультипотентная стволовая клетка ЗТМ —зачаток третьего моляра
ЭСК — эмбриональные стволовые клетки
HTSC (human tumor stem cell) — стволовые клетки опухоли человека ЦНС — центральная нервная система ВМ — внеклеточный матрикс ГАГ — гликозаминогликан СК — стволовые клетки
DPSC (dental pulp stem cell) — стволовые клетки пульпы зуба SHED (stem cells from human exfoliated deciduous teeth) — стволовые клетки молочных зубов
PDLS (periodontal ligament stem cells) — стволовые клетки периодонта BMSSC (bone marrow stromal stem cells) — стромальные стволовые клетки костного мозга
BMMSC (bonemarow mesenchymal stem cells) —- мезенхимные стволовые клетки костного мозга АТ — антитело
FITC (fluoresceiniso-thio-cyanate)
ALK — субстрат
DAPI — 6'-диамидино-2-фенил-индол
РАС (paclitaxel) — митотический ингибитор, используется в химиотерапии рака
MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium — субстрат фирмы Promega для теста на клеточную пролиферацию ЕО — этилен оксид РО — пропилен оксид

ОГЛАВЛЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Стволовые клетки
1.2. Стволовые клетки зуба
1.3. Нейропротекторные свойства мультипотентных стволовых клеток
1.4. Длительное криогенное хранение стволовых клеток
1.5. Стволовые клетки и опухолевый рост
1.6 Фармакотерапия онкологических заболеваний
1.7 Неионные полиэфирные белок-сополимеры
1.8 Системы скрининга противоопухолевых препаратов
1.9 Внеклеточный матрикс
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Генетический и морфологический анализ культуры мультипотентных стволовых клеток зачатка третьего моляра человека
3.2 Влияние длительного криоконсервирования мультипотентных стволовых клеток из зачатка третьего моляра человека на нейропротекторные свойства клеток
3.3 Влияние неионного блок-сополимера (Плуроника) Р85 на пролиферацию мультипотентных стволовых клеток зачатка третьего моляра человека in vitro
3.4 Исследование взаимодействия стволовых и опухолевых клеток человека при совместном ко-культивировании на различных биологических субстратах
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

рост опухолевых клеток и их чувствительность к химиотерапии (Muehlberg, Song, Krohn, Pinilla, Droll, Leng, Seidensticker, Ricke, Altman, Devarajan, Liu, Arlinghaus and Alt, 2009, Rhodes, et al., 2009). С другой стороны, существует гипотеза о стволовых опухолевых клетках, объясняющая развитие онкологических заболеваний нарушением в генетическом аппарате стволовых клеток, приводящем к их онкологической трансформации (Mayol, et al., 2009, Visvader, et al., 2008). Экспериментальные данные указывают на существование определенной популяции опухолевых клеток со свойствами стволовых клеток. Данная популяция обладает повышенной устойчивостью к традиционным методам лечения и служит источником новых опухолевых клеток при рецидивах после окончания противоопухолевой терапии. Разработка систем скрининга, позволяющих выявить эти редкие популяции -непростая задача. Не так давно Gupta et al. предложил модель, основанную на стимуляции эпителиально-мезенхимного перехода в клетках рака молочной железы для получения стволовых раковых клеток (Gupta, et al., 2009). Данный подход позволил успешно идентифицировать препарат, обладающий более чем в 100 раз большей эффективностью по сравнению со стандартным химиотерапевтическим препаратом, используемым в клинике при лечении рака молочной железы. Тем не менее, монослойные культуры, состоящие из одного типа клеток, накладывают определенные ограничения на скрининг противоопухолевых препаратов из-за неспособности моделировать сложные пространственные и химические параметры микроокружения.
Как было сказано ранее, возникновение онкологического заболевания
может быть связано с онкогенной трансформацией единичной стволовой
клетки. Также известно, что стволовые клетки способны взаимодействовать
со своим микроокружением, влияя на характер дифференцировки соседних
клеток и вызывая их репрограммирование. Поэтому разработка новых
моделей для исследования взаимодействия опухолевых и стволовых клеток,
которые бы позволили независимо анализировать обе клеточные популяции в