Иммунные протеасомы в развитии иммунной системы и в условиях эффективного и неэффективного иммунного ответа у крыс

• Автор: Карпова, Ярослава Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.03.05, 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Структура протеасомы и ее функционирование
1,119Б субчастица
1.2 20Б субчастица
1.3 Убиквитинирование белка-субстрата
1.4 Биогенез 208 протеасом
2 Иммунные протеасомы и их функции
2.1 Иммунные протеасомы, строение и сборка
2.2 Участие иммунных протеасом в образовании антигенного эпитопа
2.3 Участие иммунных протеасом в запуске сигнала на уничтожение дефектных клеток
2.4 Участие иммунных протеасом в образовании антигенных эпитопов из ШЛА
2.5 Участие иммунных протеасом в активации наивных СВ8 Т-лимфоцитов
2.6 Участие тимопротеасом в положительной селекции тимоцитов
2.7 Участие иммунных протеасом в отрицательной селекции тимоцитов
2.8 Неиммунные функции иммунных протеасом
3 Лимфоидные органы иммунной системы и нелимфоидные органы
3.1 Взаимоотношения между центральными и периферическими органами иммунной системы и нелимфоидными органами
3.2 Строение селезенки
3.3 Строение печени
3.4 Особенности иммунитета печени
3.4.1 АПК клетки печени и специфический иммунный ответ
3.4.2 Неспецифический иммунный ответ в печени
3.5 Возможная роль протеасом в развитии портальной толерантности
4. Липополисахарид - индуктор воспалительного процесса
5 Иммунные протеасомы и злокачественные опухоли
5.1 Иммунные протеасомы в развитии раковых опухолей
5.2 Особенности роста и регрессии опухоли Walker 256, трансплантированной крысам линии Brattleboro
6 Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1 Животные и схемы экспериментов
1.1 Схема работы по исследованию иммунных протеасом в раннем развитии
1.2 Схема работы по исследованию иммунных протеасом в развитии донор-специфической иммунологической портальной толерантности
1.3 Схема работы по исследованию иммунных протеасом при росте и регрессии злокачественной опухоли Walker 256у крыс линий WAG и Brattleboro
2 Получение осветленных гомогенатов органов
3 Определение активностей протеасом
4 Вестерн-блоттинг
5 Приготовление криостатных срезов органов и последующее иммунофлуоресцентное окрашивание
6 Выделение мононуклеарных клеток печени
7 Проточная цитометрия
8 Статистический анализ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1 Протеасомы в раннем развитии селезенки и печени крысы
1.1 Изменение уровня иммунных протеасом, 19S-aKmueamopa протеасом и тотального пула протеасом в раннем развитии печени и селезенки крысы
1.2 Химотрипсин- и каспазаподобная активности протеасом в раннем развитии печени и селезенки крыс
1.3 Распределение иммунных протеасом по клеткам селезенки и печени
1.3.1 Иммуногистохимическое исследование клеток на срезах селезенки

1.3.2 Иммуногистохимическое исследование клеток на срезах печени
1.3.3. Иммуноцитохимическое исследование мононуклеарных клеток печени
1.4 Изменение количества иммунных протеасом в печени плода при индукции воспаления у матери инъекцией LPS
2 Иммунные протеасомы при индукции донорспецифической толерантности
2.1 Уровень половых гормонов у различных групп животных
2.2 Гистологическая картина трансплантатов на 30 сутки
2.3 Содержание протеасом в селезенке, печени и аллотрансплантате яичника
2.4 Активность протеасом в селезенке, печени и аллотрансплантате яичника
2.5 Иммуногистохимическое исследование аллотрансплантата яичника
3 Протеасомы в опухоли Walker 256 у крыс линий WAG и Brattleboro
3.1 Протеасомы в опухоли Walker 256у крыс линии Brattleboro
3.2 Протеасомы в опухоли Walker 256у крыс линии WAG
3.3 Экспрессия молекул МНС класса 1 в опухоли Walker 256у крыс линии
Brattleboro и WAG
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Иммунные протеасомы в раннем онтогенезе иммунной системы
1.1 Иммунные протеасомы в развивающейся селезенке
1.1.1 Изменение количества иммунных протеасом в развивающейся селезенке
1.1.2 Активность протеасом в развивающейся селезенке
1.1.3 Иммунные протеасмоы в клетках формирующейся селезенки
1.1.4 Особенности формирования морфофункциональных зон селезенки
1.2 Иммунные протеасомы в развивающейся печени
1.2.2 Количество иммунных протеасом в развивающейся печени
1.2.2 Активность протеасом в развивающейся печени
8 Проточная цитометрия
Фрагменты опухоли Walker 256 крыс исследуемых линий перетирали через клеточный фильтр и суспензировали в растворе 0,1 М PBS (pH 7,4), 1х105 клеток инкубировали с мышиными антителами, меченными РЕ, к крысиным CD3 или RT1A, разведенными в необходимой пропорции (таблица 1) с 0,1 М PBS с добавлением 1% бычьего сывороточного альбумина, в течение 1 часа при комнатной температуре. Для внутриклеточных маркеров клетки опухоли фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 минут, затем обрабатывали 0,1% сапонином на 0,1 М PBS и инкубировали последовательно моноклональными мышиными антителами к CD68 ночь при 4°С и антителами к IgG мыши, меченными FITC в течение 30 минут при комнатной температуре. Неспецифическая флуоресценция определялась с помощью соответствующих изотопических контрольных антител, меченных РЕ, и антител к IgG мыши, меченных FITC. Флуоресценция клеток измерялась на приборе Cell Lab Quanta SC («Beckman-Coulter», США).
9 Статистический анализ
Статистическую обработку данных проводили с помощью программного приложения Excel. Данные представлены как среднее значений, полученных минимум в 3-х аналогичных экспериментах, ± стандартная ошибка. Статистическую достоверность оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа, достоверными считали различия при р < 0,05.