Молекулярно-генетическое исследование генов клеточного цикла (TP53, BRCA1) и системы биотрансформации ксенобиотиков при онкопатологии

• Автор: Галикеева, Гузель Фанилевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 159 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Генетическая регуляция клеточного цикла (обзор
научной литературы)
1.1. Роль гена BRCA1 в обеспечении целостности генома и контроле 19 клеточного цикла
1.2. Роль гена ТР53 в регуляции клеточного цикла и инициации 28 клеточной смерти
1.3. Роль генов II фазы системы биотрансформации ксенобиотиков 40 (GSTM1, GSTT1, GSTP1, CAT, NQOl) в регуляции клеточного цикла
ГЛАВА 2. Материалы, методы и объем исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Материалы исследования
2.3. Методы исследования
2.3.1. Генетические методы. Семейный анализ
2.3.2. Методы исследования ДНК
2.3.2.1. Выделение геномной ДНК
2.3.2.2. Амплификация полиморфных участков ДНК
2.3.2.3. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.3.3. Определение содержания цитокинов
2.3.3.1. Определение1 концентраций IL-ip, 1Е6ДЫ0 и a-TNF
2.3.3.2 Определение концентрации IL1RA
2.3.3.3 Определение концентрации IL2, IL4
2.3.4. Статистический анализ результатов
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов исследуемых генов 74 с риском развития онкопатологии
3.1.1. Исследование распределения частот генотипов и аллелей 74 полиморфных вариантов генов системы онкосупрессии {ТР53 и BRCA1) у здоровых индивидов и в группе онкопатологией
3.1.2. Исследование распределения: частот аллелей и генотипов 88 полиморфных вариантов генов системы биотрансформации

ксенобиотиков (GSTM1, GSTT1, GSTP1, CAT, NQOl) у здоровых индивидов и в группе с онкопатологией
3.2. Анализ сочетаний генотипов пяти полиморфных локусов изученных генов и исследование роли межгенных взаимодействий у здоровых индивидов и больных онкопатологией
3.3. Анализ наследования аллелей генов ТР53 и BRCA1
3.4. Типирование полиморфных локусов генов ТР53 и BRCA1 в ДНК периферической крови и опухолевой ткани у больных раком молочной железы
3.5. Иммуноферментный анализ концентрации цитокинов в сыворотке крови у больных РМЖ
3.6. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов со средними значениями количественных показателей цитокинов (ANOVA) у больных РМЖ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
жкт желудочно-кишечный тракт
РМЖ рак молочной железы
BRCA1 brest cancer
CAT каталаза
CRP С-реактивный белок
GST глутатион-8-трансфераза;
GSTT1 глутатион-8-трансфераза тета 1;
GSTM1 глутатион-8-трансфераза мю 1;
GSTP1 глутатион-8-трансфераза пи 1;
IL-ip интерлейкин-1 бета
IL1RA антагонист рецептора интерлейкина
IL2 интерлейкин
IL4 интерлейкин
IL6 интерлейкин
IL10 интерлейкин
LD linkage disequilibrium (неравновесие по сцеплению)
NQOl ЫАО(Р)Н-хиноноксидоредуктаза
P вероятность
TP53 tumor protein
a-TNF фактор некроза опухолей альфа
x2 критерий значимости различий популяций по распределениям частот генотипов

Прямая индукция апоптоза под действием белка р53, является первой и очень быстрой реакцией на массивные повреждения. Например, при облучении радиочувствительных тканей (тимус или селезенка) уже через 30 минут наблюдается транслокация белка р53 в митохондрии и активация эффекторной каспазы-3, тогда как наработка достаточного количества продуктов р53-регулируемых генов отмечается только через 6-7 часов, и она связана с транскрипционной активностью белка р53 в ядре (Erster, 2003).
Существует несколько альтернативных путей индукции клеточной смерти, и практически на каждом ключевом этапе определенную роль играют р53-регулируемые гены (Vousden, 2002; Vousden, 2000; Gottlieb, 1998).
Действуя на митохондриальный путь, р53 подавляет транскрипцию анти-апоптозного белка Вс12 и активирует транскрипцию про-апоптозных белков Вах (Miyashita, 1995), Noxa (Oda, E., 2000), p53AIPl (Oda, K., 2000) и Puma (Nakano, 2001; Yu, 2001). Кроме того, p53 повышает чувствительность клеток к внешним про-апоптозным лигандам, стимулируя транскрипцию генов FAS (Owen-Schaub, 1995) и KILLER/DR5 (Wu, 1997). Белок р53 индуцирует также множество других белков, связанных с индукцией апоптоза. К ним относятся Perp (Attardi, 2000), Pidd (Lin, 2000), Wipl (Fiscella, 1997), Scotin (Bourdon, 2002), GML, STAG1, p53CABCl, p53RDLl (Nakamura, 2004) и другие.
Белок p53 индуцирует гены, продукты которых осуществляют изменение редокс баланса клетки. К этим генам относятся: PIG3, PIG8 (Polyak, 1997), FDXR (Hwang, 2001) и некоторые другие. В результате происходит резкое повышение уровня внутриклеточных кислородных радикалов, что способствует ускорению клеточной смерти (Polyak, 1997).
В отсутствии стрессорных воздействий белок р53 в клетке
практически не обнаруживается за счет активных механизмов
протеасомной деградации. Сейчас появляется все больше сведений о роли